研究課題/領域番号 |
22K06559
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分47020:薬系分析および物理化学関連
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研究機関 | 国立医薬品食品衛生研究所 |
研究代表者 |
正田 卓司 国立医薬品食品衛生研究所, 有機化学部, 室長 (60435708)
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研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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キーワード | O結合型糖鎖 / 誘導体化試薬 / 蛍光 / 糖鎖 / 分析 |
研究開始時の研究の概要 |
糖鎖は糖タンパク質の構造の安定化,体内動態,生物活性,免疫原性などに関与している.糖鎖修飾はタンパク質の翻訳後修飾の一つであるが,わずか1残基の違いが,糖タンパク質の機能を左右する.そのため,糖タンパク質の一つである抗体医薬品などにおいて,糖鎖構造の詳細かつ正確なモニタリングは医薬品のライフサイクルを通して不可欠な課題である.そこで本研究では,新規のO結合型糖鎖誘導体化試薬をデザイン・合成し,O結合型糖鎖を高感度かつ簡便に誘導体化が可能な手法を開発することとした.
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研究実績の概要 |
【目的】糖タンパク質バイオ医薬品の糖鎖には不均一性があり,培養方法や精製方法などの変動によりそのプロファイルに変化が生じるため,有効性及び安全性に大きな影響を与える可能性がある.したがって,バイオ医薬品の品質を確保するためには,糖鎖の解析が重要となる.糖タンパク質の糖鎖はAsn残基の側鎖に結合するN型糖鎖とSer/The残基の側鎖に結合するO型糖鎖に大別される.N結合型糖鎖は遊離酵素や誘導体化試薬を利用した解析方法が多数あるもの,O結合型糖鎖には手法が少なく,その生理機能も不明な点が多い.本研究では高感度検出が可能なO型糖鎖評価法の開発を目指し,蛍光性糖鎖標識試薬の開発を行った. 【方法】 PMPは強塩基,加熱条件下で糖の還元末端に2分子反応する.そこで,ピレンのエキシマー蛍光を利用することを考えた.エキシマー蛍光とは,2分子のピレンが近傍に存在するときに観察される,ピレン単体の蛍光よりも長波長の蛍光である.すなわち,PMPとピレンのエキシマー蛍光を組み合わせることで,未反応の試薬をモノマー蛍光で,糖と反応した試薬をエキシマー蛍光で検出できると考えた. 【結果・考察】 PMPとピレンをアルキル鎖でつないだMPPPをデザインし(Fig. 1),アルキル鎖長が異なる誘導体を複数合成した.NaOH存在下,70℃でGalNAcとMPPPを反応させ,LCMSで分析したところ目的生成物のピークを確認した.そのピークにはエキシマー蛍光があり,未反応の試薬のモノマー蛍光と明確に区別することができた.また,エキシマー蛍光の強度は,アルキル鎖長に依存した.
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
デザイン合成した化合物が期待通りの光学特性を有していることを明らかとした.またさらなる合成展開により,溶解性の改善も見られた.
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今後の研究の推進方策 |
糖タンパク質を用いてO結合型糖鎖の誘導体化を試みる.
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