| 研究課題/領域番号 |
22K06574
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分47020:薬系分析および物理化学関連
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| 研究機関 | 国立感染症研究所 |
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研究代表者 |
楠 英樹 国立感染症研究所, 次世代生物学的製剤研究センター, 室長 (90334060)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | Bcl-xL / B型肝炎ウイルス / HBx / 多量体化 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
HBxとBcl-xL相互作用が引き起こす細胞内カルシウムイオン（Ca2+）濃度上昇とHBV複製メカニズムを理解するため、HBxが誘導するBcl-xL多量体のCa2+チャネル機能とHBV複製に焦点を当てる。本研究では、HBxによるBcl-xL多量体形成機構を明らかにし、そのCa2+チャネル機能とHBV複製の解析を行う。また、Bcl-xL多量体化を阻害する低分子化合物を探索し、HBV複製を抑制できるかを検討する。そして、HBV複製阻害剤の開発につなげる。
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| 研究実績の概要 |
本研究では、HBxとBcl-xLが相互作用すると、Bcl-xLの多量体化を誘導し、Bcl-xL多量体がCa2+チャネルとして機能し、HBV複製を引き起こす可能性について検討することを目的としている。Bcl-xLの多量体の検出には、主に核磁気共鳴（NMR）法を用いている。本年度は、昨年度に調製方法を確立したHBx BH3領域蛋白質を用いて、Bcl-xLのオリゴマー化の解析を実施した。また、膜模倣環境下でHBx BH3領域蛋白質（ワイルドタイプ）がBcl-xLを多量体化すること、多量体化したBcl-xLに、結合親和性の高いリガンドを添加するとモノマーに戻り、そのリガンドと結合していることをNMR解析で再確認した。Bcl-xL多量体化を阻害できるかどうか、いくつかの低分子化合物を用いて検討した。現在、Bcl-xLとより強く結合する低分子がBcl-xL の多量体化を阻害できることが分かった。HBx BH3領域とBcl-xL融合蛋白質を用いて、さらに、その相互作用を詳細に解析しているところである。その中で、この融合蛋白質は、Bcl-xLよりも温度安定性が低くなることが示唆された。これは、HBxがBcl-xLに結合するとBcl-xLの構造を不安定にしていることを示唆している可能性がある。今後は、HBxによるBcl-xLの構造不安定性の再現性を確認するとともに、HBx変異体や他のBH3ペプチド との比較を行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
HBx全長の調製を現在も検討しているため、「やや遅れている」とした。今後もHBx全長の調製を検討していくと共に、既に調製できているHBx BH3領域蛋白質とその変異体を用いて、Bcl-xL多量体化メカニズムを明らかにしていく。
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| 今後の研究の推進方策 |
研究計画通りに進めていく予定である。HBx全長は、いくつかのグループで報告されているNusAやDsbCといった蛋白質を付加した融合蛋白質での調製を試みる。Bcl-xL多量体化に、HBx BH3領域のどのアミノ酸が必須であるかを引き続き検討する。また、HBx/Bcl-xL相互作用によるBcl-xLのCa2+チャネル機能とHBV複製の解析を行う。
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