| 研究課題/領域番号 |
22K06586
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分47030:薬系衛生および生物化学関連
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
藤木 恒太 東京女子医科大学, 医学部, 助教 (80632504)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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| キーワード | ストレス応答 / 尿細管細胞死 / カドミウム |
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| 研究開始時の研究の概要 |
尿細管細胞死は、外的ストレス依存的に腎障害が生じる多くの場合に観察される現象であり、その機序の解明は、腎障害の治療や予防に繋がる。今なお身近な環境汚染物質であるカドミウムにヒトが曝露された場合も近位尿細管細胞死が観察されるが、その機序は未だに不明な点が多い。そこで、ヒト尿細管（HK-2）細胞を用いた解析を中心に、カドミウム曝露依存的細胞死誘導シグナルの解明を目指す。
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| 研究実績の概要 |
尿細管細胞死は、外的ストレス依存的に腎障害が生じる多くの場合に観察される現象であるため、その機序の解明は、腎障害の病態機序の理解に繋がる重要な課題である。環境汚染物質カドミウムにヒトが曝露された場合も尿細管細胞死が観察されるが、その機序は不明な点が多い。そこで、申請者は、ヒト尿細管（HK-2）細胞を用いてカドミウム曝露依存的細胞死誘導シグナルの解析を行うことにした。
これまでに解析を行った結果、①カドミウム曝露下のHK-2細胞では、不良タンパク質が凝集した構造体・aggresomeが形成される、②カドミウム曝露下に形成されたaggresomeにautophagosomeが集積する、③autophagy-lysosome分解系促進因子TFEB・TFE3を機能阻害することで、カドミウム曝露依存的HK-2細胞死が促進される、ことがわかった。このことから、カドミウム曝露下のHK-2細胞では、カドミウム曝露依存的に蓄積した不良タンパク質をaggresome-autophagy-lysosome系を介して消化することで、蓄積した不良タンパク質が発現するタンパク質毒性を抑制している可能性が示された。また、近年、不良タンパク質凝集体が特定の因子を取り込むことで、細胞内シグナルを制御することが報告されている。申請者はカドミウム曝露下にaggresomeに集積する因子に注目し、探索した結果、複数の候補因子を同定した。現在は、それら因子がaggresomeに集積する意義および機構について解析を進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
現在、抗体染色法を用いてaggresomeに集積する因子を探索している。aggresomeおよび中心体については、本来の抗原となる因子以外を認識してしまい、抗体が染色してしまう場合が非常に多い。そのため、aggresomeが染色された場合でも、その抗体の染色像が確かなものであるのかを確認する必要があり、その作業に時間を要している。その結果、予定よりも多少遅れが生じているが、全体としては順調に進捗している。
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| 今後の研究の推進方策 |
次年度以降は、現在までに得られている知見を踏まえながら研究計画を修正し、解析を進めていく。具体的には、①初代培養細胞でもHK-2細胞と同様、カドミウム曝露依存的なaggresome形成が観察されるか、またその周辺の分子機序が保存されているかを確認する。②aggresome集積候補因子が、真にaggresomeに集積するのかを確認する。③同定したaggresome集積因子がaggresomeに集積する機序、また、それら因子がaggresomeに集積する意義について検討する。③同定したaggresome集積因子が、カドミウム刺激特異的に形成されるaggresomeに集積するのかを調べるため、神経変性疾患病理モデルにおいて観察されるaggresomeでもそれぞれの因子が集積するかを確認する。
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