研究課題/領域番号 |
22K06822
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分48010:解剖学関連
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研究機関 | 関西医科大学 |
研究代表者 |
北田 容章 関西医科大学, 医学部, 教授 (80324614)
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研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 520千円 (直接経費: 400千円、間接経費: 120千円)
2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2022年度: 2,470千円 (直接経費: 1,900千円、間接経費: 570千円)
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キーワード | 脊髄損傷 / 有尾両生類 / 遺伝子組換え / 細胞運命追跡 / 神経細胞新生 / 神経再生 / 再生生物学 |
研究開始時の研究の概要 |
本研究では、成体環境においてほぼ完全な神経機能的再建を果たす成体イモリを用い、新生神経細胞を標識可能とする、あるいは新生神経細胞を人為的に死滅させることの可能な遺伝子改変成体イモリを作出し、神経細胞新生の意義を問う。また、"成体型再生"におけるより強力な神経細胞新生誘導因子の同定や、三次元的組織再構築を担う細胞の同定も行う。本研究により、これまで成体イモリの脊髄損傷研究では用いられてこなかった近代的な実験手法を適用することで、"成体型再生"特有の再生様式の本質的な意義や鍵となる分子を明らかとし、ヒト脊髄損傷の新たな再生戦略や新規治療法の創造への波及効果を狙う。
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研究実績の概要 |
本研究は、脊髄損傷後生じる自発的な構造的・機能的再建を果たすことの可能な有尾両生類である成体イモリを用い、成体イモリ脊髄再生における神経細胞新生の意義と、神経細胞新生を生じせしめる因子の同定、そして3次元的組織再構築を果たす由来細胞の特定を目指すものである。2022年度では、特に成体イモリ脊髄再生における神経細胞新生の意義に関する研究を行う予定となっていた。部位特異的遺伝子組換えによるspatiotemporalな遺伝子発現制御手法を応用し、ドライバーとして脊髄上衣細胞特異的ERT2CreERT2、レポーターとして神経細胞特異的loxP-mKate2-loxP-EGFPおよび神経細胞特異的loxP-mKate2-loxP-ジフテリア毒素Aをそれぞれトランスジェニックしたイモリを作成し、F2世代以降を得ている。これまでに、これらの動物を掛け合わせたダブルトランスジェニック動物を得、幼若個体における神経細胞におけるmKate2発現を確認と、タモキシフェン投与後の新生神経細胞におけるEGFP発現を確認した。このことは、幼若個体において脊髄上衣細胞が新生神経細胞の細胞ソースとして機能していることを示している。タモキシフェン投与後の脊髄損傷によりEGFP発現細胞が増加することから、損傷刺激が神経細胞新生のトリガーとなっていることが示唆されている。2022年度においては、申請時計画に先駆けて神経細胞新生を生じせしめる因子の同定についてもアプローチした。損傷2週間後に再生組織を採取しトランスクリプトーム解析を行うことで、発現亢進を見た30遺伝子を同定し、in situ hybridizationによりそれぞれの発現パターンを確認した。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
イモリ脊髄再生における神経細胞新生の意義に関する実験系においては、遺伝子組換え後の蛍光蛋白質発現様式が想定通りの結果を示していたが、成体においてはmKate2の赤色蛍光が減弱することが確認されており、新たな神経細胞特異的プロモーターの同定・開発が必要であるかもしれないと考えている。一方で、申請時の計画に先駆け、神経細胞新生を生じせしめる因子の同定に関してもアプローチし、神経細胞新生に資することが期待される因子として新たな遺伝子群が見出された。これらのことから、全体としてはおおむね順調に進展していると判断されるものと考えた。
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今後の研究の推進方策 |
イモリ脊髄再生における神経細胞新生の意義に関する実験系においては、成体におけるmKate2赤色蛍光の減弱の度合いと、それによる新たな神経細胞特異的プロモーターの同定・開発の必要性の見極めが必要となる。神経細胞新生を生じせしめる因子の同定については、見出された新たな遺伝子群の正常脊髄および損傷脊髄組織における遺伝子発現様式と、モルフォリノやゲノム編集によるその機能を明らかとする実験に移る。
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