| 研究課題/領域番号 |
22K06947
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分49020:人体病理学関連
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
新井 恵吏 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 准教授 (40446547)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2022年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
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| キーワード | micropapillary / lung adenocarcinoma / DNA methylation / anoikis / cancer / pathology |
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| 研究開始時の研究の概要 |
微小乳頭状構築をとるがんは、諸臓器で共通してリンパ節・遠隔臓器転移リスクが高く予後不良である。微小乳頭状構築は、アノイキス抵抗性や腫瘍免疫回避を介して転移能亢進に関与すると考えられている。本研究では微小乳頭状構築を有する悪性度の高い肺腺がんに注目し、多数のヒト臨床試料を用いてエピゲノム・ゲノム異常を網羅的・統合的に解析する。マイクロダイセクション手法によって正確に組織を分取し分子異常を比較することで、アノイキス抵抗性や腫瘍免疫回避に関連する微小乳頭状腫瘍の分子異常を見出し、真にがんの悪性形質に関与し診断・治療標的となり得る分子・分子経路を網羅的に同定する。
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| 研究実績の概要 |
慶應義塾大学病院で肺摘除術を受けた微小乳頭状成分をもつ肺腺がん症例48例の病理診断後のホルマリン固定パラフィン包埋標本から、微小乳頭状成分(T2)とその背景の通常型腺癌成分(T1)を組織マイクロダイセクション法を用いて相互の混入を避けて分取し、ゲノムDNAを抽出し、ゲノム網羅的DNAメチル化プロファイルを高密度ビーズアレイ (Infinium MethylationEPIC Kit) によって取得した。
全例全プローブのDNAメチル化率を用いた教師なし階層的クラスター分析と主成分分析では、一部の症例を除き、同症例のT1とT2が近い位置にクラスタされた。通常型腺癌が微小乳頭状性格を獲得する際に生じるDNAメチル化の変化は、個体間の多様性に比して小さいと考えられた。
プローブごとのDNAメチル化率についてT1とT2のWelchの対応なしT検定を行ったが、多重検定における補正を行った上で有意なプローブを確保することができなかった。そこでT1からT2へのDNAメチル化変化が高頻度に観察されるプローブに着目した。プロモーター領域と推定されるプローブにおいて、T2でT1に比してDNAメチル化率が10%以上の亢進を示す症例が6症例以上 (解析症例の半数以上)であったプローブは247プローブであった。このうち、複数プローブに紐づき、多数例で同一方向のDNAメチル化異常が集積する遺伝子として、遺伝子Aを見出した。遺伝子Aは肺がんで発現しているが、低発現群では高発現群に比して予後不良と報告されており、微小乳頭状肺癌の悪性度の高さを説明できる可能性がある。
247プローブが所属する遺伝子について、WebGestaltを用いてエンリッチメント解析を行ったところ、発がんに関わるとしてよく知られた分子経路Aと分子経路Bが挙げられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
2023年度までに48例全ての解析を終了した。同一腫瘍内で微小乳頭状性格を獲得する際に生じる分子異常が小さいことは想定通りであったため、科学的に妥当な統計学的な工夫によって目的の分子・分子経路の絞り込みを行うことができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
抽出した分子のmRNA・蛋白発現の通常型腺癌・微小乳頭状成分の差違を検証する。マイクロダイセクションによって得られたT1・T2組織からRNAを抽出してRT-PCRを行うか、免疫組織化学によって組織切片上で評価する。現時点では候補分子が少ないため、検証の結果良好な結果が得られなかった場合はさらに候補分子を抽出することを検討する。現在のT1は種々の組織亜型を含んでいるため、T1取得部位の組織標本からT1の組織亜型を同定し、組織亜型毎に分けてT1とT2の差異の解析を行うことで、微小乳頭状性格を獲得する際に生じる分子異常の抽出の効率化を進める。また、使用しているマイクロアレイは十分に高い解像度を持っているため、既に得られた蛍光強度を用いてin silico解析によってコピー数異常等のデータを取得可能であり、これらのデータを統合的に解析していく。
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