| 研究課題/領域番号 |
22K07298
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分50020:腫瘍診断および治療学関連
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
西尾 信博 名古屋大学, 医学系研究科, 特任准教授 (00586430)
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| 研究分担者 |
高橋 義行 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (40432273)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
中途終了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | GD2 / CAR / piggyBac |
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| 研究開始時の研究の概要 |
CARの構造は1)抗原認識部位、2)スペーサー、3)共刺激分子、4)細胞内シグナル伝達ドメインにより成り立っている。共刺激分子の違いにより、サイトカイン産生能、増殖能、あるいは体内持続性が異なることが知られているが、共刺激分子以外の構成成分がCAR-T細胞の機能に与える影響は未だ不明である。本研究では、linker部分とspacer部分がCAR-T細胞の機能に与える影響を明らかにし、最適化することでより効果の高いCAR-T細胞を開発する。
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| 研究実績の概要 |
本研究では、CARの構成成分のうち、scFv部分の中のVHとVLをつなぐlinker部分の長さとspacer部分の長さに着目して、CARを改変し、その機能解析を実施する。 ベースとなるCARはGD2を標的としたGD2.CARを用い、遺伝子導入には代表者らが開発したpiggyBacトランスポゾン法を用いる。 異なる抗原認識部位の配列情報とCD28、4-1BBなどの異なる共刺激分子をもつGD2.CARに、さらにlinkerとspacerを改変した複数のGD2.CARコンストラクトを作成した。上記のGD2.CARを、申請者が所有するCD19.CARトランスポゾンベクター(pIRII-CAR.CD19.28.ζ)のCAR配列と入れ替え(pIRII-CAR.GD2.28.ζまたはpIRII-CAR.GD2.4- 1BB.ζ)、GD2.CARトランスポゾンベクターを作成した。GD2CAR-T細胞製造のために培養条件を最適化した。末梢血リンパ球に、ヌクレオフェクション装置を用いて、GD2.CARトランスポゾンベクターとpiggyBac遺伝子転位酵素ベクターを導入し、自家feeder細胞とインターロイキン(IL)-7およびIL-15を添加した培地中で共培養したのちに増殖刺激を加え、GD2CAR-T細胞を作成した。フローサイト メトリーを用いてT細胞上のGD2.CAR発現率、CD45RA/CCR7細胞比率等を測定した。さらにCAR-T細胞と神経芽腫細胞株をサイトカイン無添加・10%血清存在下で共培養し、GD2.CAR-T細胞の抗原特異性、細胞傷害活性、細胞表面exhaustionマーカー、CAR-T細胞のpersistencyなどを検討した。その結果をもとに免疫不全マウスを用いたin vivo実験を実施した。
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