| 研究課題/領域番号 |
22K07341
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分51030:病態神経科学関連
|
|---|
| 研究機関 | 北海道大学 |
|---|
研究代表者 |
湯山 耕平 北海道大学, 先端生命科学研究院, 特任准教授 (80415546)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
|
|---|
| キーワード | 細胞外小胞 / エクソソーム / アルツハイマー病 / アミロイドbeta / デジタル検出 |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
神経細胞から放出される細胞外小胞エクソソームは，その表面膜にアルツハイマー病(AD)病因分子のアミロイドbeta(Abeta)が結合することや，グリア細胞へAbetaを運搬することで脳内Abeta代謝に関与することが知られている。しかしAD病態の脳内Abeta蓄積過程におけるAbeta結合エクソソーム量の推移は不明である。本研究課題では，Abeta結合エクソソームを微量で定量可能なデジタル測定技術を用いて，ADモデルマウスの脳内Abeta蓄積過程におけるAbeta結合エクソソーム量の変動を解析する。
|
| 研究実績の概要 |
細胞外小胞エクソソームは，脳内アミロイドbeta(Abeta)の凝集や蓄積に関与することが示唆されているが, アルツハイマー病(AD)アミロイド病理の形成や進行過程でAbeta結合エクソソーム量がどのように変動するのかは不明である。2023年度は，2022年度に計測したADモデルマウス脳組織中のAbeta結合エクソソーム量と血中のAbeta結合エクソソーム量の比較解析を行った。Abeta結合エクソソーム量測定は，デジタル測定法で実施した。ガングリオシドGM1 に結合するコレラ毒素サブユニットB(CTB)で標識された磁性ビーズでGM1含有エクソソームを捕捉後に，DNA オリゴ標識された抗Abeta抗体(BAN50)を反応させ，磁性ビーズ/エクソソーム/抗Abeta抗体の複合体を形成させた。その後，蛍光反応試薬と混合し測定チップへ送液し，抗体を標識しているDNA オリゴでInvasive Cleavage Assay法で蛍光反応させた。最後に測定チップを蛍光顕微鏡で撮影し，蛍光ウェルをカウントすることで，Abeta結合エクソソームの濃度を算出した。その結果，脳組織内Abeta結合エクソソーム量は脳内Abeta蓄積に伴って減少するが、血中Abeta結合エクソソーム量は増加する傾向が顕著にみられ，脳組織と血中のAbeta結合エクソソーム量が逆相関する結果が得られた。しかし今回計測した脳組織エクソソーム画分には，電子顕微鏡観察の結果、小胞の他に膜断片の混入が認められた。脳内/血中エクソソームの比較には，エクソソーム分画の改良または脳脊髄液中のエクソソーム計測を行う必要があると考える。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は計画通り脳内と血液中のAbeta結合エクソソーム量の比較結果をモデルマウスを使った実験で示すことができたため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
脳内／血液中Abeta結合エクソソーム量の相関を精査するとともに，血液中で検出されるAbeta結合エクソソームの由来細胞タイプの解析を行う。
|
