研究課題/領域番号 |
22K07767
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分52040:放射線科学関連
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研究機関 | 富山大学 |
研究代表者 |
渡部 明彦 富山大学, 学術研究部医学系, 講師 (20377253)
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研究分担者 |
小川 良平 富山大学, 学術研究部医学系, 准教授 (60334736)
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研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2024年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
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キーワード | バキュロウイルス / ネオ抗原 / 放射線 / がん免疫 / 放射線治療 / 免疫誘導 / ブースター / 組換えウイルス |
研究開始時の研究の概要 |
放射線のがん治療効果は、放射線の細胞毒性によるものと長く考えられてきた。近年、放射線刺激により引き起こされる免疫も治療効果に関与していることが明らかにされてきた。本研究計画では、腫瘍への放射線照射で活性化する免疫を追加免疫(ブースター)として捉え、がん特異抗原遺伝子を発現する組換えウイルスを、放射線照射前に、いわゆる初回免疫として投与することで治療効果の増強を図る。まずは、発現を検出しやすいモデル抗原を設定し、その遺伝子を発現する組換えウイルスとマウス由来の組換えがん細胞を構築してモデル実験系を確立し、その仮説を検証する。本研究計画の完遂を通して、より効果の高いがん治療の実現を目指す。
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研究実績の概要 |
組換えバキュロウイルスの入手に関しては、共同研究先の金沢大学のワクチン応用免疫研究室から分与して頂く予定であったが、保存組換え体が失活してしまったため分与が難しくなった。そこで、外注することとし、組換えバキュロウイルスの設計を行い、現在、組換えウイルス構築について打ち合わせ中である。研究の中心となる組換えウイルスの利用がままならないため、大きな実績はまだないが、いくつかの進捗について言及したい。 まず組み換えバキュロの設計であるが、まだ最終決定ではないが、EF1プロモーター下にルシフェラーゼ遺伝子を配置して、下流側にSV40のPolyA部位を導入した遺伝子カセットをゲノム中に導入した組換えバキュロウイルスを構築してもらおうと考えている。現在、打ち合わせ中で、構造が決定したらすぐに構築を開始して貰う予定である。 Luc発現細胞を構築、単離をおこなった。ハイグロマイシン耐性遺伝子を発現するルシフェラーゼ発現ベクターを購入し、マウスのがん細胞であるRenca細胞と4T1細胞に遺伝子導入をおこなった。Geneticin存在下で培養し、それぞれの細胞株でコロニーを形成する5クロンを単離増殖した後に、ルシフェラーゼアッセイおよびウエスタンブロッティングで発現量を評価した。Renca細胞では、特に多く発現するクロン(他のものと比較して数百倍の発現量のもの)を取得した。また4T1細胞では取得した10クロンで発現量に大きな差はなかった。それぞれの取得クロンで増殖を比較したが、大きな違いはなかった。実験では今回得られた細胞を利用する予定である。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
BALB/cマウスを使用することを想定して、細胞の準備を行った。具体的には、保有していた乳がん由来の4T1細胞と新たに入手した腎がん由来のRenca細胞の培養を開始した。さらに、モデルネオ抗原としてホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現するベクターを安定的に導入した細胞株の構築を試みた。ネオマイシン耐性遺伝子を保持するルシフェラーゼ遺伝子発現ベクターを細胞に導入し、ルシフェラーゼ発現細胞を5クロンずつ単離した。これらの細胞のルシフェラーゼの発現量と増殖効率を勘案して使用クロンを決定した。 ルシフェラーゼ遺伝子を発現するバキュロウイルスについては、予定を変更して、急遽外注することとした。現在、組換えウイルスの設計を終わり、その構築について依頼先と交渉中である。 組換え実験、動物実験の申請をおこなった。現在審査中で、審査が終わり次第、組換えウイルスの構築依頼をおこない、組換え体の解析に移りたい。5月中には認可されると考えて計画を進めている。
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今後の研究の推進方策 |
今後は、組換えバキュロウイルスが入手できたら、in vitro、in vivoでの発現の解析を行う。また、ルシフェラーゼ遺伝子を発現するマウスのがん細胞をマウスに投与して、腫瘍形成能を確認する。このような基礎的な検討を実施した後に、担がんマウスへの放射線治療における、モデルネオ抗原を発現する組換えバキュロウイルス投与の効果についての検討を始める。組換バキュロウイルスの投与が腫瘍退縮を促進した場合は、当初計画していた免疫学的な解析をおこなう。腫瘍の退縮が認められない場合は、放射線の照射条件や、組換え体の接種条件の検討をおこなう。
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