脂肪性肝疾患を背景とした肝線維化過程への肝再生関連増殖因子の関与機構の解明

• 研究課題/領域番号: 22K07954
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 審査区分: 小区分53010:消化器内科学関連
• 研究機関: 山形大学
• 研究代表者: 星川 恭子 山形大学, 医学部, 助教 (20613053)
• 研究分担者: 芳賀 弘明 山形大学, 医学部, 准教授 (70466613)
• 研究期間 (年度): 2022-04-01 – 2026-03-31
• 研究課題ステータス: 交付 (2023年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2025年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2024年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
• キーワード: 脂肪肝 / 肝再生 / Epiregulin / 非アルコール性脂肪肝炎 / 非アルコール性脂肪性肝炎

研究開始時の研究の概要

非アルコール性脂肪性肝炎 (Nonalcoholic Steatohepatitis: NASH) では，肝線維化の程度が予後を規定する．これまでNASH線維化の過程における肝再生の関与についてはほとんど解明されていない．申請者らは以前より，肝再生にかかわる液性因子の一つであるEpiregulinに注目し研究を行っている．申請者らの最終目的は，脂肪性肝疾患を背景とした肝線維化の過程における肝再生機構について明らかにすることであるが，本研究では，基礎的検討としてNASHモデル動物を用いて，肝再生関連増殖因子の肝線維化への関与とその機構を明らかにすることを目的とした．

研究実績の概要

申請者らの最終目的は，脂肪性肝疾患を背景とした肝線維化の過程における肝再生機構について明らかにすることであるが，本研究では，基礎的検討としてNASHモデル動物を用いて，肝再生関連増殖因子の肝線維化への関与とその機構を明らかにすることを目的としている．
2022年度は，Epiregulin遺伝子欠損（KO）マウスへの食事負荷NASH誘導を行い，肝組織標本作成，血液生化学検査をおこなった．高脂肪食餌負荷マウスは，普通食給餌マウスと比較し，給餌期間を通し体重増加を認め肥満を呈した．さらに普通食給餌群では，Epiregulin-KOとWild type（WT）間に体重の差はなかったが，FFC食餌負荷群では，KOマウスで有意に体重が重い結果であった．肝体重比は，WTと比較しKOマウス群で有意に重かった．肝組織の解析では，肝の脂肪化はWild-typeとKOマウスの両群で認めたが，KOマウス群で脂肪化の程度が増悪していた印象であった．また，肝酵素であるALT値はWTと比較しKOマウス群で高い結果であった．この結果からは，Epiregulinが，脂肪組織や肝の脂肪蓄積に関与している可能性が考えられた．
2023年度は，前年度の実験で得られた肝組織を用いて肝線維化や肝内炎症の程度を解析した．シリウスレッド染色の結果，FFC食餌負荷群では，KOマウスで染色領域が減弱していた．同様にα-SMA染色もFFC食餌負荷群では，KOマウスで染色領域が減弱していた．
マクロファージマーカーであるF4/80免疫染色の検討では，炎症細胞浸潤はFFC食負荷KO群で軽減していた．また，TUNELアッセイの結果，アポトーシスはエピレグリンKOマウスで減弱していた．引き続き組織，生化学的な解析をすすめていく予定である．

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

脂肪性肝疾患を背景とした肝線維化の過程における肝再生機構について明らかにすることを目的としている本研究においては，2022年度は，Epiregulin遺伝子欠損（KO）マウスへの食事負荷NASH誘導を行い，肝組織標本作成，血液生化学検査をおこなった．また2023年度は肝の組織学的解析（Sirius-red染色，F4/80およびTUNEL染色）を行った．おおむね当初の予定通りに研究が進行している．

今後の研究の推進方策

おおむね当初の計画通り実験が進んでいるため，2024年度は，前年度までに得られた肝組織や血清などを用い，レプチン値測定（ELISA）および遺伝発現解析（TNF-α，MCP-1，ACTA2，Collagen1α1など）を予定している．