| 研究課題/領域番号 |
22K07973
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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| 研究機関 | 久留米大学 |
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研究代表者 |
中村 徹 久留米大学, 医学部, 准教授 (30341332)
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| 研究分担者 |
増田 篤高 久留米大学, 医学部, 助教 (40647872)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | MASH / CD34陽性細胞 / 肝硬変 / 細胞療法 / 肝再生 / 血管幹細胞 / NASH |
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| 研究開始時の研究の概要 |
申請者らはこれまでに進行した肝硬変を対象とした末梢血CD34陽性細胞移植による肝再生治療に関する基礎・臨床研究を行い、治療効果を報告してきた。現在、C型非代償性肝硬変に対する肝再生療法について多施設共同非盲検無作為化試験を臨床研究として実施中であるが、次期検証的医師主導治験実施の際はNASH肝硬変患者も対象とする予定である。本研究の目的はNASH肝発癌モデルマウスに対しCD34陽性細胞移植を行い、RNA-Seq解析を用いて肝組織(非癌部・癌部)のプロファイルを明らかにし、線維化改善の機序解明とともに肝発癌への影響を調べ、より安全で効率的な治療法へと発展させるための基盤研究である。
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| 研究実績の概要 |
in vivo実験について、MASH肝硬変モデルマウスを作製した。生後12週まで給餌する1)肝線維症モデル(STAM-fibrosisモデル)と生後16週まで給餌し肝癌が自然発症する2)肝発癌モデル(STAM-HCCモデル)を作製した。移植細胞(培養CD34陽性細胞)はいずれのモデルも生後8週目に脾臓より投与(5x10e6 cells/kg・BW)した。1)抗線維化効果をSirius Red染色で評価したところ、対照群1.18±0.17%に対し、細胞移植群(CD34o群)で0.97±0.18%と改善傾向を示したが有意差を認めなかった。そのため、2週ごと2回移植(CD34t群)したところ0.59±0.06%と有意に改善した。αSMAに対する免疫組織化学染色で単位面積あたりの陽性率を評価したところ、Sirius Red染色と同様の結果で、CD34t群で有意に低下した(対照群:0.28±0.05%,CD34o:0.26±0.05%,CD34t:0.14±0.02%)。2)腫瘍形成について、腫瘍個数は対照群で4.1±3.4個に対し、CD34o群で1.2±1.1と両群間に有意差を認めず、腫瘍サイズ(腫瘍長径の合計)においても対照群で14.6±4.3mmに対し、CD34o群で4.8±5.1mmと両群間に有意差を認めなかった。in vitro実験について、STAMマウス肝臓をコラゲナーゼ還流法を用いて、parenchymal cell(PC)とnon-parenchymal cell(NPC)への分散を行った。正常肝の分散経験はあったが脂肪肝の分散経験はなかったため、使用するコラゲナーゼ濃度や還流時間の設定に時間を要した。実験を重ね、分散がうまくいったとしてもその後の培養系が再現性をもって継続できず苦戦した。理由はコラゲナーゼ濃度が濃くなるあるいは処理時間が長くなることで肝組織へのダメージが大きくなり、脂肪滴を含有したPCのviabilityを保てなかったことが原因と考えられた。そこで自動組織分散・破砕装置(gentleMACS)を用い同様の分散を行ったところ、PCはviability 95%以上、細胞数 6.3～8.0x10e6個、NPCはviability 97%以上、細胞数 4.7～5.0x10e6個と実験に耐えうる組織分散に成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
最も時間を要する肝癌が自然発症する肝発癌モデルマウス（STAM-HCCモデル）の作製に成功し、サンプリングも完了した。現在、肝組織の組織学的解析等を進めている。またNASH肝硬変モデルマウス（STAM-fibrosisモデル）については、現在プロテオミクス解析中であり、結果待ちの状態であるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
最終年度は、すでに作製済みのSTAM-fibrosisモデルマウスのプロテオミクス解析結果に対するin vitro系での裏実験を行う予定である。
STAM-HCCモデルマウスについては、腫瘍/非腫瘍部位に分けて、CD34陽性細胞移植による腫瘍形成への影響についてさらに検討を進める予定である。
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