| 研究課題/領域番号 |
22K07987
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
|
|---|
| 研究機関 | 九州大学 |
|---|
研究代表者 |
国府島 庸之 九州大学, 医学研究院, 共同研究員 (00650748)
|
|---|
| 研究分担者 |
合谷 孟 九州大学, 大学病院, 助教 (30884754)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
|
|---|
| キーワード | 非アルコール性脂肪肝炎 / NASH / 線維化 / crown-like structure / クッパー細胞 / マクロファージ / 肝星細胞 / 一細胞遺伝子発現解析 / hCLS / 非実質細胞 |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
NASHの確定診断は肝生検による組織診断によってなされるが、組織学的にはhCLSと呼ばれる特徴的な構造が観察され、これらの構造は肝線維化の起点となることが知られている。NASHにおける肝細胞周囲肝線維化は肝細胞の脂肪沈着やhCLSが生じる領域とは空間的な差異が存在し、その進展のメカニズムについては不明な点が多い。本研究ではNASH肝組織に存在する非実質細胞を分離し1細胞遺伝子発現解析を行うことにより、NASH病態進展に関わる非実質細胞種の同定と細胞内環境の変化に加え細胞間相互作用解析による活性化機構について明らかにすることで、NASHに特徴的なhCLSや線維化の形成機構を解明する。
|
| 研究実績の概要 |
NASH症例の肝生検検体よりmRNAを抽出して、糖・脂質代謝関連遺伝子、線維化関連遺伝子、酸化ストレスや小胞体ストレス関連遺伝子、サイトカイン/ケモカインなどの免疫関連遺伝子、線維化関連遺伝子などの発現解析を行ったところ、脂質代謝関連遺伝子、β酸化関連、酸化ストレス関連遺伝子の発現が著明に亢進していることが確認された。次に肝生検組織の病理学的特徴と各種遺伝子発現変化との関連について検討を行ったところ、Fibrosisにおいて、CXCL8、CXCL10等のケモカインの遺伝子発現が優位に増加することが確認された。hCLSの程度と組織のSteatosisおよびInflammationは有意な相関を認めるとともに、トランスアミナーゼと線維化マーカーであるP-III-Pが有意に相関していた。hCLSの程度は一部のサイトカイン/ケモカインとともにCol1A1などの細胞外基質の遺伝子発現とも有意な相関を認めており、hCLSがNASH病態進展における炎症、線維化の起点となっている可能性が示唆された。
MC4R-KOマウスに高脂肪・高コレステロール飼料を負荷したNASHマウスを作成し、hCLSを可視化するために蛍光標識したF4/80抗体を経静脈投与後にサンプリングし、未固定肝組織からビブラトームで薄切標本を作成した。蛍光顕微鏡でhCLSを確認し、バキューム方式のマイクロダイセクションであるUnipicKTMを用いてhCLSを回収し、そこから非実質細胞を分離した。対象群として野生型マウスの肝非実質細胞およびNASHマウスの非hCLS部の肝非実質細胞を用いて一細胞遺伝子発現解析を行った。NASHマウスのhCLS部では形質細胞様樹状細胞の集団の比率が高いことが明らかとなった。また、hCLSと非hCLS部位で発現細胞の割合に差がある遺伝子群を同定した。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究計画に沿って、NASHに特徴的な病理学的構造の形成や線維化進展に伴って変化する遺伝子を明らかにし、マウスモデルにおいては、空間情報を残した状態でhCLSを抽出する技法を確立し、一細胞遺伝子発現解析を行うことができた。
|
| 今後の研究の推進方策 |
令和5年度において同定したhCLS部で発現が亢進している遺伝子群について、NASH生検組織検体を用いてqPCR解析あるいは免疫組織学的染色を行い、マウスモデルを用いた基礎研究の臨床的妥当性をヒト検体を用いて検証する
|
