| 研究課題/領域番号 |
22K08028
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
鈴木 伸三 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (30723746)
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| 研究分担者 |
畑 昌宏 東京大学, 医学部附属病院, 特任臨床医 (90892505)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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| キーワード | 胃がん / APC / マウス |
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| 研究開始時の研究の概要 |
GAPPS(Gastric adenocarcinoma and proximal polyposis of the stomach:家族性胃底腺ポリポーシス)の原因となる、APC遺伝子非翻訳領域SNP模倣する遺伝子改変マウスをCRISPR/Cas9システムを利用し作成および解析することで、GAPPSの癌化メカニズム解明と、そのシグナル経路を標的とした治療可能性及び臨床応用へと展開するための研究基盤の確立する。
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| 研究実績の概要 |
本研究では、GAPPSのモデルマウスを作成するためには、原因SNPが発見されたAPC遺伝子の5’非翻訳領域promoter周辺において、翻訳後に生成される蛋白に違いがないため、ヒトとマウスのDNAの相同性とpromoterの機能的類似性を確認するため、promoter assayによりpromoter活性長とSNP(-195AtoC,-118del)より転写活性がヒト、マウス間で高い類似性を示すことが確認できた。SNPがpromoter内ということを考慮し、promoter活性に影響し得るFrt配列等のselection cassetteの残存が避けれない古典的な方法ではなく、最新のCRIPSR/Cas9システムを使用しマウス受精胚前核に精製Cas9およびゲノム編集用sgRNA,ドナーoligoを注入しGAPPSモデルマウス作成を試みたところ、当該SNPを保有するモデルマウスの作成に成功した。HE染色、PAS染色による少数の24週齢GAPPSモデルマウスの病理学的解析を行ったところ、マウス胃体部の肥厚と上皮化成が観察できた。一方、大腸、小腸において腫瘍の発生等がないかを観察しところ、ヒトGAPPSとの類似するように表現型は見られなかった。作成したマウスより、初代オルガノイドの培養に成功し、その増殖assayを行ったところ、GAPPSモデルマウスより作成したオルガノイドにて増殖能の亢進を確認することができた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
GAPPSの原因SNPのプロモーター活性の、ヒトマウス間の相動性、類似性に関する検討を実施し想定通りプロモーター活性に類似性があることを確認できた。続いて、CRISPR/Cas9システムした原因SNPを保有するモデルマウスの作成に成功しており、おおむね研究の進捗は順調である。
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| 今後の研究の推進方策 |
作成したGAPPSモデルマウスの解析数を増加させ、また、現在２４週齢まで解析を終えているが、さらに長期間の解析を行うことで、発癌の有無やさらなる表現型の有無を評価していく予定である。また、GAPPSモデルマウスより作成したオルガノイドを使用して、Wnt経路への依存性や、病態の原因となる他のシグナル経路を探索していく計画である。
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