| 研究課題/領域番号 |
22K08078
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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| 研究機関 | 香川大学 |
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研究代表者 |
正木 勉 香川大学, 医学部, 客員研究員 (30335848)
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| 研究分担者 |
小原 英幹 香川大学, 医学部附属病院, 講師 (10612476)
岩間 久和 香川大学, 医学部, 准教授 (20398035)
仁木 敏朗 香川大学, 医学部, 助教 (40558508)
田所 智子 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (50813177)
森下 朝洋 香川大学, 医学部附属病院, 講師 (60423430)
大浦 杏子 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (80834639)
谷 丈二 香川大学, 医学部, 助教 (00596075)
中原 麻衣 香川大学, 医学部附属病院, 病院助教 (00865610)
藤田 浩二 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (50749421)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
2023年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | エピガロカテキンガレート / 耐性癌細胞 / micro RNA / 抗がん作用 / 肝細胞癌 / 分子標的治療薬 / 耐性株 / ガレクチン-9 / microRNA |
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| 研究開始時の研究の概要 |
最近エピガロカテキンガレート(EGCG)は細胞増殖抑制機構を介して副作用の少ない患者の優しい補助的癌治療薬なりうる可能性が報告されつつある。(molecules 23:2284,2018)。肝細胞癌(分子標的治療薬耐性となった癌細胞も含めて)に対するアポトーシスの誘導により癌抑制効果を持つGa1-9と細胞周期G1アレスト効果を持つEGCGの併用療法が肝細胞癌に対しGa1-9単独と比較しより強い治療効果があるかどうかを検証する。さらにその併用療法の癌抑制機構のメカンズムと腫瘍内のmicroRNAが変化することにより抗腫瘍活性を持つ可能性についての基礎的検討をする。
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| 研究実績の概要 |
緑茶に含まれるエピガロカテキンガレート（以下：EGCG）は疫学的に癌の発生予防効果が報告されており、ある種の癌細胞の抑制効果も報告されている。しかし
ながら肝癌の分子標的治療薬Lenvatinib、Sorafenib耐性癌細胞株に対するEGCGの効果は明らかではない。そのような耐性癌細胞を含む肝癌細胞株におけるEGCG
の抗腫瘍効果について基礎的解析をした。
【方法】（１）昨年度Hep3Bを用いて培養液中にLenvatinib、Sorafenibの耐性株を樹立させIC５０値を決定した。（２）Hep 3BのWild type, 耐性株におけるEGCGの細胞増殖抑制効果をMTT assayで解析した。（３）Lenvatinib、Sorafenib耐性肝癌細胞株Hep3Bをヌードマウスの皮下に移植し、EGCGを腹腔内に投与し、抗腫瘍効果を検討した。（３）Lenvatinib、Sorafenib耐性肝癌細胞株Hep3B をヌードマウスの皮下に移植し、EGCGとガレクチン９をEGCGに腹腔内に投与し、抗腫瘍効果を検討した。（４）Lenvatinib、Sorafenib耐性肝癌細胞株Hep3BにEGCGの抗腫瘍作用効果に関連するmicroRNAを網羅的に解析した。。
【成績】Hep3BのWild 細胞株、Lenvatinib、Sorafenibの耐性株においてEGCGの濃度依存的に細胞増殖抑制効果を示した。しかしながらガレクチン９の相乗効果は認められなかった。また、EGCG投与前後にHep3BのmicroRNAは明瞭なクラスターを形成し、EGCG投与により抗腫瘍効果に関連するmicroRNA分子を見出だした。その分子は、miR-RNA7151、miR--8063, miR-4665, miR--575, miR5787, miR-6131であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
理由
この一年で、予定以上の研究成果を出すことができた。今は、得られた結果の部分EGCGにおける、肝癌細胞株の抑制を論文にまとめていく段階になっている。
2種類の肝癌細胞株HuH-7、Hep3Bを用いて培養液中にLenvatinib、Sorafenibの耐性株を作成できた。耐性株におけるEGCGの細胞増殖抑制効果をin vitro, in
vivoで解析したところ、Hh7には、癌抑制効果見られなかったが、Hep3Bには、癌細胞抑制効果が見られた。
また、EGCG投与前後にHep3BのmicroRNAは明瞭なクラスターを形成し、EGCG投与により抗腫瘍効果に関連するmicroRNA分子を見いだした。その分子は、miR-RNA7151、miR--8063, miR-4665, miR--575, miR5787, miR-6131であった。また、ガレクチン―9との相乗効果が認められなかったが、現在ガレクチン9を抗腫瘍剤シスプラチンに変更して、研究を進めている。ほぼ、予定より、早く進行している。
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| 今後の研究の推進方策 |
まずはチップからHep3BのWild 細胞株、Lenvatinib、Sorafenibの耐性株においてEGCGの濃度依存的に細胞増殖抑制効果に関連する分子を見出した。これを別の方法で確認する。その分子は、miR-RNA7151、miR--8063, miR-4665, miR--575, miR5787, miR-6131であった。これらの分子が正しいことをReal time PCRで確認する。またこれら分子がEGCGでの添加によってチップで増量したことをReal time PCRで確認する。次に確認されたmicroRNAをin vivoの系でHep3BのWild 細胞株、Lenvatinib、Sorafenib耐性株のヌードマウスに移植した腫瘍の周りに注入し、EGCGと同様に抗腫瘍効果を示すかどうかを確認する。もし確認できれば、肝細胞癌に対する新しい抗腫瘍効果を持つmicroRNA となる。
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