| 研究課題/領域番号 |
22K08285
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分53030:呼吸器内科学関連
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
有木 茂 札幌医科大学, 医療人育成センター, 准教授 (80464478)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | 自然免疫 / コレクチン |
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| 研究開始時の研究の概要 |
生体防御タンパク質の一つである肺コレクチンは、呼吸器表面における自然免疫において重要な役割を果たしている。感染微生物の排除過程における肺コレクチンの機能解析は、感染微生物との直接的な相互作用、免疫細胞表面の受容体との相互作用などの機能ばかりが注目されてきた。本研究では、感染微生物と共に免疫細胞に取り込まれた後の肺コレクチンの役割を解析することで、肺コレクチンの新規生理活性を探索する。
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| 研究実績の概要 |
肺サーファクタントに含まれる肺コレクチンは、呼吸器の自然免疫において中心的な役割を果たす生体防御タンパク質である。肺コレクチンの生体防御機能については、感染微生物の凝集・増殖抑制、マクロファージによる貪食促進など、感染微生物と肺コレクチンの結合を基にした機能解析が行われてきた。しかし、肺コレクチンの一つであるSP-Dが、これまでに報告のない酵素活性を示す可能性を見出した。本研究では、SP-Dが本当に酵素活性を示すのか、また、そのような酵素活性が生理的にどのような意義をもつのかを明らかにすることを目的としている。
昨年度に引き続き、質量分析を用いた解析、カラムクロマトグラフィーを用いたフラクションアッセイを行ない、SP-D試料中の夾雑タンパク質の影響を否定する実験を行なった。しかし、フラクションアッセイ中に総活性が著しく低下する現象を解決することができず、本年度も明確な結論を得ることができなかった。
そこで、これまでに使用していたSP-Dとはソースの異なるタンパク質を用いて解析を試みた。これまではCHO-K1細胞により発現・精製したリコンビナントタンパク質を使用していたが、肺胞洗浄液から精製したタンパク質（native SP-D）を用いた。その結果、native SP-Dもリコンビナントタンパク質と同様に酵素活性を示し、その特性（最適pHや基質特異性）も昨年度に解析したリコンビナントタンパク質のものと同様であった。異なる出発材料から、異なる方法で精製したタンパク質試料が同じ活性を示したことから、やはり夾雑タンパク質ではなくSP-Dに活性があると考えられる。来年度、native SP-Dを用いてフラクションアッセイを再度行い、明確な結果を得たい。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
クロマトグラフィー操作の過程で、解析対象としている活性が失われるという、当初予想していなかった現象のため、フラクションアッセイが計画通りに進んでいない。そのため、以降の研究計画に進むことができず、研究全体が遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでとは調整方法の異なる試料を用いるなど軽微な変更を行うが、基本的な計画は変更せずに継続する。
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