研究課題/領域番号 |
22K08365
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分53040:腎臓内科学関連
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研究機関 | 東京医科大学 |
研究代表者 |
森山 能仁 東京医科大学, 医学部, 准教授 (20439821)
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研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2026-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2025年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2024年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
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キーワード | カベオラ / 糸球体内皮細胞 / 糸球体上皮細胞 / アルブミン / エンドサイトーシス / ゲニステイン |
研究開始時の研究の概要 |
糸球体腎炎や糖尿病性腎症の進行危険因子としての蛋白尿・アルブミン尿の関与は大きく、実臨床でも治療の第一目標はその減少である。尿中へアルブミンの排出には糸球体内皮細胞・基底膜・上皮細胞からなる糸球体係蹄の通過が重要であり、これまで係蹄の細胞の通過経路として内皮細胞におけるフェネストラや上皮細胞の足突起間のギャップなど細胞間経路が考えられていたが、我々はこれまでにアルブミンの糸球体内皮・上皮細胞へのカベオラ介在性細胞内通過経路を報告した。このカベオラ経路は各種腎炎・腎症に共通するアルブミン尿の経路の一つと考えられ、この経路阻害に伴うアルブミン尿減少による普遍的なCKD新規治療探索を行う。
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研究実績の概要 |
これまで我々はアルブミン尿の新機序としてカベオラを介し糸球体内皮細胞・糸球体細胞内を通過する経路を解明・報告し、更にカベオラエンドサイトーシスを阻害することによりアルブミン尿の減少効果が得られることを証明してきた。本研究ではカベオラ経路を薬剤の投与で阻害することによりアルブミン尿の減少効果の得られる新規薬剤を探索することで腎疾患において普遍的に治療できる薬剤の探索を目的としている。 本年度は、カベオラエンドサイトーシスの際にreactive oxygen species(ROS)によってSrcキナーゼが活性化され、続いてカベオリン-1が活性化によりカベオラが増殖すること、カベオラが細胞膜から切断されエンドサイトーシスすることに着目し、Srcキナーゼ阻害効果のある、大豆イソフラボンに多く含有される植物性エストロゲンであるゲニステインを使用し実験を進めた。 まずゲニステインの糸球体上皮・内皮細胞に対する投与における適正濃度を調べるために、LDH放出試験にて細胞毒性試験を確認し200ug以下と決定した。続いて50ug, 100ugそして200ugのdose dependentにゲニステインの前投与後に30分、60分、120分でtime courseでアルブミンを投与後に免疫染色でカベオリン-1の発現と細胞内のアルブミン量を測定したところ、経時的にアルブミン量は増加し、用量依存性にゲニステインの投与でカベオリン-1の発現は低下し、それに伴いアルブミン量も減少した。また、western blotでも細胞内アルブミン量はゲニステイン用量依存に低下した。 この結果よりアルブミンの糸球体上皮・内皮細胞のカベオラ介在性エンドサイトーシスがゲニステインにより阻害されることが明確になった。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
2022年8月に東京女子医大から東京医大に勤務先が変更となり、実験器具、環境などが大きく変化し、実験の立ち上げから再度やり直しプロトコールの再構築を行わなければならず、計画より遅れている。
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今後の研究の推進方策 |
in vitroに関してはSrcの発現がゲニステインの投与で低下することを確認し、作用機序の仮説の証明、機序の解明を行う。また、transwells plateを用い、ゲニステインによる細胞内透過の阻害が確認できることを確認する。これらの実験によりin vitroでのゲニステインによって糸球体上皮・内皮細胞のカベオラ介在性エンドサイトーシスが阻害されることが明らかになる。 更にin vivoの研究まで進め、慢性腎臓病に普遍的な薬剤となりうる可能性を証明するため種々のモデルマウスを作成しゲニステインのアルブミン尿の減少効果を確認する予定である。
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