| 研究課題/領域番号 |
22K08453
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分54010:血液および腫瘍内科学関連
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
皆川 健太郎 神戸大学, 医学研究科, 医学研究員 (80432574)
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| 研究分担者 |
若橋 宣 神戸大学, 医学研究科, 医学研究員 (80596651)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2027-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2026年度: 260千円 (直接経費: 200千円、間接経費: 60千円)
2025年度: 390千円 (直接経費: 300千円、間接経費: 90千円)
2024年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2023年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | TFL / Regnase4 / CRISPR-Cas9 / Zc3h12d / Regnase / CART / 白血病 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
Transformed follicular lymphoma gene (TFL)はT細胞のRNAの制御を通じて様々なサイトカインを分解する。また、脳内のCD4+T細胞のIL-17を調節することで、自己免疫性脳炎の維持に関わる。白血病治療におけるChimeric antigen receptor (CAR)-T細胞は、細胞の消耗が課題である。エフェクターメモリー細胞においてTFLの関与が注目されていることから、TFLをノックダウンしたCAR-T細胞が炎症を維持し、急性骨髄性白血病細胞に対する治療効果を高めるか検証する。病態に関わるサイトカイン群を同定し、TFLを制御する転写因子の解明も行う。
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| 研究実績の概要 |
キメラ抗原受容体（CAR）T細胞は、再発・難治性の白血病の根治治療に有効であることが示されています。T細胞の枯渇は、CAR-T細胞が反応しない問題の1つです。私たちは最近、ミエロイド抗原CD33をターゲットにしたCAR-TをAML治療のために開発しました。これは第三世代のCARで、標的抗原を認識した後、強固な活性化に寄与します。このCAR-Tは、過剰なCAR-T細胞の増殖を無効にする安全性の高い自殺スイッチを備えています。今回、マウスモデルでその有効性が確認され、今後の遺伝子改変細胞による臨床効果が期待されます。 私たちはこれまでに、リンパ腫患者の染色体転座から「トランスフォームド・フォリキュラー・リンパ腫（TFL）」と呼ばれる新規遺伝子を発見しています。この遺伝子は、ZC3H12Dとしても知られており、RNaseモチーフを持ち、そのRNAの3'非翻訳領域（UTR）を通じていくつかのサイトカインを分解することが明らかになっている。私たちは、TFLがT細胞で発現し、活性化するとその発現量が増加すること、また、TFL欠損マウスは実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）を誘発した後、炎症が長期化することを発見しました。最近、他の研究者が、TFLは顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）陽性エフェクターメモリー（TEM）CD4 T細胞では低いレベルで発現していることを発見した。GM-CSFは、EAEなどの慢性炎症疾患の発症および維持に関与していると考えられており、TEMは他のT細胞サブセットと比較して最も高いレベルのGM-CSFを発現している。本研究では、TFLを欠失させたCAR-T細胞がin vivoでの殺癌活性を高めるかどうかを評価したいと考えています。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
現段階でTFLのノックダウンされたT細胞を作成することはCRISPRシステムを用いて可能となっており、DNAレベルでの90％以上のノックダウン効率を確認できた。次にタンパクレベルでのノックダウン効率の検証をフローサイトメトリーやウェスタンブロッティング方などを用いて現在行っている。十分にノックダウンされたT細胞の作成を待って、CARTの作成に取り掛かる。
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| 今後の研究の推進方策 |
CART細胞においてTFLのノックダウンされたものとそうでないものとの比較を行うことで、抗腫瘍活性について検討する。また、種々の細胞表面マーカーを用いてメモリー細胞の増殖の有無を確認する。
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