| 研究課題/領域番号 |
22K08536
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分54020:膠原病およびアレルギー内科学関連
|
|---|
| 研究機関 | 産業医科大学 |
|---|
研究代表者 |
山形 薫 産業医科大学, 医学部, 講師 (80533786)
|
|---|
| 研究分担者 |
田中 良哉 産業医科大学, 医学部, 教授 (30248562)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2024年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
|
|---|
| キーワード | 関節リウマチ / CD20陽性B細胞 / スーパーエンハンサー / P2RY10 / ChIP / B細胞 |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
公開データベースを駆使して自己免疫疾患・関節リウマチ(RA)の遺伝学と関連し、B細胞で強い転写活性を示し高発現する遺伝子としてP2RY10 [活性化リン脂質・リゾフォスファチジルセリン (LysoPS)の細胞膜受容体をコードする遺伝子]に着目した。①健常人とRA患者のrs6619397-T/Aの遺伝子型を決定し、P2RY10発現との関連を調べる。②P2RY10遺伝子近傍のヒストンH3K27acピークから発現する各eRNAをノックダウン後、P2RY10の発現を担うeRNA種を見出す。③LysoPSでP2RY10を刺激後、メモリーB細胞から抗体を産生するプラズマB細胞への分化制御について検討する。
|
| 研究実績の概要 |
ゲノムワイド関連解析(GWAS)により関節リウマチ(RA)疾患に感受性のある遺伝子群が特定された。我々はin silico解析により、CD20陽性B細胞でスーパーエンハンサー（SE;巨大なエンハンサー集団）による制御を受け、B細胞膜上で高い発現を示し、X染色体にコードされ、リウマチ遺伝学と関連するP2RY10 (P2Y Receptor Family Member 10) 遺伝子を見出した。しかしながら、その発現制御機構、B細胞における機能、そしてRA病態形成における役割は不詳である。
令和4年度（初年度）は１）まず末梢血単核球細胞において健常人(n=30)に比してRA患者(n=75)のP2RY10 mRNAの発現は有意に低値であった。２）つぎに小規模解析では健常人(n=6)に比してRA患者(n=6)においてP2RY10タンパク質の発現も低下していた。3) そしてP2RY10 mRNAの発現においてRA患者間に性差は検出されなかった。４）またCD19陽性T細胞のP2RY10遺伝子および近傍のRA感受性SNP領域(rs6619397)において、AA遺伝子型のRA患者はTT遺伝子型に比してスーパーエンハンサー(SE)形成因子Rad21およびSMC3のリクルートがそれぞれ減弱していた。以上より、AA遺伝子型を有することでP2RY10遺伝子の近傍においてSE形成が障害を受け、P2RY10遺伝子の発現が低下するメカニズムが予想された。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
健常人に比して関節リウマチ(RA)患者の末梢血単核球において、P2RY10の発現が低下することを見出した。RA感受性SNP(rs6619397)を有するAA遺伝子型のRA患者由来B細胞はTT遺伝子型に比して、スーパーエンハンサー形成が障害を受けている可能性が示唆された。以上より、P2RY10遺伝子発現制御に関するメカニズムの一端を明らかにした。 従って、進捗状況は概ね順調に推移していると判断した。
|
| 今後の研究の推進方策 |
健常人とRA患者由来の各B細胞のSE構造を示すP2RY10遺伝子領域において、ChIPアッセイを 使してSE活性を制御するさらなる転写制御因子を見出す。以上より、RA患者のB細胞のP2RY10発現制御におけるクロマチン構造変換機構の関与を明らかし、SE活性を評価することが可能である。
ナイーブB細胞からPlasmocyte(抗体産生細胞)分化誘導系にP2RY10のリガンドであるLysophosphatidylserine (LysoPS)を投与して、Plasmocyte分化におけるP2RY10シグナルの役割を検討する。
一方、PlasmocyteをLysoPSで刺激してIgMとIgGの各産生を定量することで、LysoPSがPlasmocyteの活性に及ぼす影響を検討する。
上記3点を踏まえRA病態形成におけるP2RY10の機能的関与について明確にすることが可能である。
|
