| 研究課題/領域番号 |
22K08937
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分55030:心臓血管外科学関連
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
白澤 文吾 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (80444719)
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| 研究分担者 |
鈴木 亮 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教 (10570319)
上野 耕司 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (30736070)
濱野 公一 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (60263787)
溝口 高弘 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (90844796)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | 細胞シート / 再生医療 / 細胞シート移植 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
細胞シートは様々な疾患に応用する研究が行われているが、臨床応用を考えたときに、細胞シートの製造コストと利便性の向上が課題である。
我々は細胞シートを凍結保存することが可能であれば、製造コストの低下、利便性が向上すると考え、これまで細胞シート凍結法の開発を行ってきた。
最近、我々は3Dフリーザーという凍結装置で細胞シートを凍結すると、解凍後の細胞の生存率が高いことを報告している。
本研究は、3Dフリーザーで凍結し、解凍後の細胞シートを動物モデルに移植することで有用性を証明するものである。
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| 研究実績の概要 |
本年度は、糖尿病C57BL/6マウスの背部に6mmの生検パンチで作製した全層欠損部位に、凍結保存後に解凍して、移植した自家線維芽細胞シートおよび他家線維芽細胞シートの治療効果を検討した。
他家線維芽細胞シートは、C3Hの尾から単離した線維芽細胞から作製した。自家線維芽細胞も同様の方法で、C57BL/6マウスの尾から単離した線維芽細胞から作製した。細胞シートの作製および凍結方法として、24-well plateの1ウェルに4.2x105個の細胞を播種して一晩培養後、ウェルの培養液を細胞保存液に置換した。24-well plateを3Dフリーザーの庫内にセットし、-35℃、20分間で細胞を凍結後、24-well plateを-80℃フリーザーで冷凍保管した。細胞シート移植2日前に、24-well plateを37℃プレート上にセットし、細胞を解凍後にウェルの溶液を培地に置換して2日間培養した。そして、上記に記載した糖尿病C57BL/6マウスの背部に線維芽細胞シートを移植した。治療実験において、凍結していない非凍結自家線維芽細胞シートおよび非凍結他家線維芽細胞シートに対して、凍結解凍後に培養した自家線維芽細胞シートおよび凍結解凍後に培養した他家線維芽細胞シートの治療効果を比較検討した。自家および他家の両方において、凍結解凍後に培養した線維芽細胞シートは、非凍結線維芽細胞シートと同等の治療効果を示す結果を得た。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
凍結解凍後に培養した線維芽細胞シートの治療効果を検証することが出来たため。
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| 今後の研究の推進方策 |
治療実験時の組織を使用して、線維芽細胞シートの凍結の有無、および、他家線維芽細胞の免疫拒絶についての病理学的解析を行う。
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