| 研究課題/領域番号 |
22K08977
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分55040:呼吸器外科学関連
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
田上 幸憲 長崎大学, 病院(医学系), 医員 (60806371)
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| 研究分担者 |
高村 祐磨 長崎大学, 病院(医学系), 医員 (20866636)
土谷 智史 富山大学, 学術研究部医学系, 特命教授 (30437884)
岩竹 真弓 名古屋大学, 未来社会創造機構, 特任講師 (40624614)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | 移植免疫 / 脱細胞化組織骨格 / バイオマテリアル / 間葉系幹細胞 / HLA-G |
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| 研究開始時の研究の概要 |
臓器再生、修復医療の進展によって使用されるようになるバイオマテリアルには、自然免疫から獲得免疫まで広範囲に弱い免疫反応が生じると考えられる。その抑制には、多方面にわたる免疫抑制効果を持つMSCを使用することが効果的であると考えられる。
本研究は、MSCによるバイオマテリアルへの免疫反応抑制機序を解明し、HLA-Gを介した免疫抑制により組織反応に対する制御の可能性について検証することを目的とする。
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| 研究実績の概要 |
今後、臓器再生、修復医療の進展によって使用されるようになるバイオマテリアルには、自然免疫から獲得免疫まで広範囲に弱い免疫反応が生じると考えられる。その抑制には、多方面にわたる免疫抑制効果を持つMSCを使用することが効果的であると考える。現在臨床使用できるMSCは、骨髄由来(Bone Marrow derived stem cell; 以下BMMSC)、脂肪由来(Adipose derived MSC; 以下ADMSC)、羊膜由来(Amnion derived MSC; 以下AMMSC)、臍帯由来(Umbilical Cord derived MSC; 以下UCMSC)の4種類が主に知られているが、それぞれの免疫抑制効果には差があると考えられる。
本研究では母子胎児間の免疫寛容に重要な役割を持つHLA-Gに着目し、in vitroで発現誘導を行い、in vivoで検証することを目的としている。
本年度はin vitro での検証として組織由来（骨髄、脂肪、臍帯）の異なるMSCにおけるHLA-Gの発現量の比較およびHLA-Gによる免疫抑制機序解明を実施した。
母子-胎児間の免疫寛容に必須の表面抗原で妊娠の維持に重要な役割を果たしているHuman Leukocyte Antigen-G (HLA-G) の遺伝子発現および抗原発現が臍帯MSCで明らかに高いことが分かった。
本年度はHLA-Gを高発現するMSCの調整に着手した。臍帯MSCに遺伝子改変せずにHLA-Gを高発現する方法を探索すべく、培養環境の構築を目指した。その結果、細胞外マトリックスをディッシュにコーティングして培養するとHLA-Gおよび血管内皮マーカーが高発現することを見出した。
引き続き臍帯MSCによるバイオマテリアルへの免疫反応抑制機序を解明し、HLA-Gを介した免疫抑制により組織反応に対する制御効果について引き続き、in vitroおよびin vivoでの検証を実施した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の研究計画に沿って、順調に解析を進められており、継続して研究推進する。
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| 今後の研究の推進方策 |
①ヒト化マウス脾臓細胞とヒトMSC(骨髄、脂肪、臍帯)によってMLRを行い、炎症細胞の減少、Treg細胞の誘導を計測する。
②HLA-Gの高発現による免疫抑制が示唆されたMSCについて、siRNA遺伝子ノックダウンおよび過剰発現細胞を用いて、炎症細胞やTreg細胞の誘導との関係を検証する。またMSCからHLA-G陽性細胞のみを抽出した細胞についても免疫抑制効果を評価する。
［マクロファージの特性解析］マクロファージは炎症促進性 (M1型) または抗炎症性 (M2型) に分類されることから、HLA-Gを高発現するヒトMSCとマウス脾臓細胞の共培養におけるM1/M2型マクロファージの比率についてフローサイトメトリーにより検証する。
［アポトーシス抑制能解析］MSCによるアポトーシス誘導抑制効果を解析する。解析方法にはリソソーム染色色素であるLysotrackerを用い、HLA-Gを高発現するヒトMSC をINF-γ刺激下で培養し、リアルタイム培養細胞観察システム(CCM-1.4Z, ASTEC) にてイメージングにより動態解析する。
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