| 研究課題/領域番号 |
22K09000
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分55040:呼吸器外科学関連
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
磯野 友美 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 (00869282)
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| 研究分担者 |
新谷 康 大阪大学, 大学院医学系研究科, 教授 (90572983)
福井 絵里子 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (90814591)
狩野 孝 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (70528455)
大瀬 尚子 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (10570559)
舟木 壮一郎 大阪大学, 大学院医学系研究科, 准教授 (50464251)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | 癌関連線維芽細胞 / 肺癌 / 微小環境 / 悪性腫瘍 / 腫瘍免疫 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
肺癌の治療法開発は急務である。腫瘍の微小環境は癌関連線維芽細胞(cancer-associated fibroblast: CAF)などから成り、腫瘍の制御への関与が示唆されている。過去、CAFを標的とした臨床試験は成功していない。原因はCAFの集団不均一性が疑われ、単独の抗原だけを標的とした戦略ではCAFを十分に攻撃できていない可能性が考えられた。そこで、本研究は新規治療法の開発を目的とし、ヒトの肺癌検体を用いて、最新の知見に基づく複数の分画でCAFを取り扱い、各分画が腫瘍増殖、腫瘍免疫に与える影響を解析すべく計画した。
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| 研究実績の概要 |
ヒト肺癌中の癌関連繊維芽細胞（CAF）の機能解析のため、まずサブグループ解析、単離を目指した。前者には50,000個,後者には100,000個のCAF細胞が必要である。2021年10月ごろ、当時のプロトコルでは肺がんの腫瘍検体を分散して得られた140,000個以上の細胞中、ほとんどがリンパ球と腫瘍細胞で、CAFは100個未満で不足であった。回収細胞数の増大のため、細胞分散の条件検討を行った。物理的条件、酵素条件を探索的に検討した。結果、現時点で、分散した細胞中2-10%程度のCAFの分画を得られており、サブグループ解析に必要な数のCAFの検出は達成できるようになった。
併行して、フローサイトメトリー(FCM)のパネルの最適化のため、クローンの条件検討を行った。channelの節約のため、damp channelにCD45,CD31,EpCAMにまとめる必要があったため、この３つは特に分離が良いクローンの選択が必要であった。結果、それぞれに最適解が得られ、damp channelは完成した。CAFに特異的なマーカーでは、FAP,CD90,PDGFRβはクローンを決定した。しかし、αSMAは分離が不十分で検討の余地を残している。
2023年1月以降は、CAFの分画をサブグループ解析するため、damp channel(CD31,CD45, EpCAM)で除外後FAP,CD90,PDGFRβの３つのCAF特異的マーカーで染色し、SPADE, tSNE などの次元削減でサブグループの特定を数回試みた。結果、現行の３つのマーカーだけでは再現性が小さいことがわかった。現在、さらに４つのマーカーの追加によるとデータの蓄積、細胞の凍結保存を行っている。パネル最適化後、単離、機能解析を予定している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
細胞分散の条件検討に難渋し、半年程度で終了すると予想していたが１年を費やした。しかし、サブグループ解析には耐えられる程度のCAFが検出できるようになり、damp channelの構築が完了するなど実験は着実に進んでいると考えられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
細胞数の不足に対しては、得られるときに大量に凍結保存して、後日技術が確定してからの解析を予定した。これが得られなかったときは、増幅培養を検討する。パネルの複雑化に対しては専門家の協力を得る。サブグループ解析の方策が最適化したら、単離、ウエスタンブロットあるいはscRNAなどによる機能解析を進めていく。
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