| 研究課題/領域番号 |
22K09184
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分55060:救急医学関連
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
田中 健之 長崎大学, 病院(医学系), 講師 (30432967)
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| 研究分担者 |
中川 慎介 福岡大学, 薬学部, 准教授 (10404211)
諸藤 陽一 長崎大学, 病院(医学系), 講師 (40437869)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2026-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2025年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2024年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2023年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2022年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
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| キーワード | ARDS / 血管透過性亢進 / 敗血症性ショック / ROCK / セロトニン |
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| 研究開始時の研究の概要 |
急性呼吸窮迫症候群(ARDS)の主座病変は細胞間接着因子破綻による血管内皮細胞バリア破綻（血管透過性亢進）だが、それを引き起こす分子基盤は依然未解明で、根本的な治療法はない。肺特異的疑似血管モデルを用いたin vitro実験で、セロトニン（5-HT)による細胞透過の亢進、5-HT拮抗やROCK阻害による細胞透過性亢進の減弱効果を確認する。in vivoの系でも同様に5-HT/ROCK阻害の効果を確認する。in vitro/in vivo両者の解析結果を合わせセロトニン/ROCK活性の血管透過性亢進機序への確固たる関与を評価する。
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| 研究実績の概要 |
本研究課題の概要は、急性呼吸窮迫症候群(ARDS)の主座病変は細胞間接着因子破綻による血管内皮細胞バリア破綻（血管透過性亢進）を引き起こす分子基盤を解析解明することである。研究分担者の諸藤、中川らが開発してBBB（脳血管関門バリア）のvitro研究のスタンダード手法となりつつある脳血管内皮細胞疑似血管壁モデルを基盤に、肺由来細胞を使用した肺特異的な血管内皮細胞疑似血管壁モデルを確立して、セロトニンやROCK活性の関与を証明するという目的である。肺特異的細胞による疑似血管壁モデル確立のステップの実験を検証中である。そのステップにおけるテクニカルな問題（使用するペリサイトの臓器特異性の問題など）の検証が課題となっている。その議論の過程で、実験手技的なノウハウを問題解決に反映できるように研究分担者の経験がすでに十分あるモデルのベースとなる脳血管内皮細胞vitroモデル（BBB vitroモデル）を使用してvitroアッセイの過程を検証する議論と計画を追加で行った。その議論の過程で、アッセイ系の基本となるBBB vitroモデルを用いて複数の抗菌薬の髄液移行評価のvitroでの検証を並行して開始しており、現在各種抗菌薬の髄液移行性の予備実験を行っている。抗菌薬の濃度測定に関しては当院薬剤部の研究協力を依頼した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
令和４年度も、前年度からの影響でコロナウイルス感染症の影響が多少あり、院内職員の規定もあり研究分担者との対面の実験、コミュニケーションに割く時間が十分ではなく、進捗に多少遅れを生じている。当初研究計画で設定していた肺特異的な血管内皮細胞と、ペリサイトとしては脳由来のペリサイト（セルライン）を予定していた。アッセイ確立には問題がないと考えているが、細胞培養の安定性に対して、この臓器特異性の要素が問題となるかどうかが議論となり、検証継続中である。BBBvitroモデルでの複数抗菌薬の髄液移行性検証は複数抗菌薬の濃度測定系の検証を薬剤部で並行して行い、まずは非刺激下非炎症下での透過性の検証中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
実験系の構築を急ぐために、可能な限り、研究分担者とのオンライン会議などで打ち合わせを行い研究を進めていたが、令和４度末から従来通りのコミュニケーションが可能となってきたため、令和５年度は遅延していた計画を進めていく準備はできている。今後の実験の進捗次第で、アッセイの安定性が問題となる場合には、肺由来のペリサイトをvivoでの分離を行い、アッセイに使用する代替案を検討していく。BBB vitroモデルを用いた抗菌薬透過性の実験は予備実験をすでに開始しており、そのアッセイの評価は薬剤部との共同研究で引き続き継続する。その手技的な確認をBBBモデルで行いながら、上記の進捗遅延のひとつの課題であるペリサイトの懸念を解決することを目標に研究計画を分担研究者と進めていく。
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