| 研究課題/領域番号 |
22K09672
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分56050:耳鼻咽喉科学関連
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
佐々木 徹 自治医科大学, 医学部, 非常勤講師 (50332614)
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| 研究分担者 |
水上 浩明 自治医科大学, 医学部, 教授 (20311938)
金澤 丈治 自治医科大学, 医学部, 教授 (20336374)
福嶋 敬宜 自治医科大学, 医学部, 教授 (40384937)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2024年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | メチル化 / 甲状腺未分化癌 / TET2遺伝子 / 脱メチル化 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
TET2を治療遺伝子とする甲状腺未分化癌への新規遺伝子治療の基礎研究である.応募者らは，これまでの研究からDNAメチル 化による癌抑制遺伝子の不活化が甲状腺未分化癌の発症に関わると考えている.甲状腺未分化癌の標準治療は確立されておらず新たな治療戦略の開発が望まれる.甲状腺未分化癌は多の癌抑制遺伝子が不活化されており，効果的な治療には同時に多数の癌抑制遺伝子を活性化する必要がある.TET2は脱メチ ル化酵素でありメチル化で不活化した複数の癌抑制遺伝子を同時に活性化できるため甲状腺未分化癌の治療に適した治療遺伝子である.TET2遺伝子による遺伝子治療の開発は治療の進歩に寄与するものと思われる.
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| 研究実績の概要 |
TET2とGFPが共発現するようにサイトメガロウイルスプロモーター(CMV)の下流にTET2-HAtag-Ires(internal ribosome entry site)-GFPの順で各遺伝子を配列したpCMV-TET2-IresGFPの作製を行った。令和4年度に選定した、甲状腺未分化癌細胞のうち、TET2の発現が少なく5hmC量が最も多い細胞を脱メチル化の頻度が少ない細胞株のうち、最適な甲状腺未分化癌細胞株にpCMV-TET2-IresGFPを遺伝子導入し一過性発現が消失するまで継代した後，セルソーターによりGFP陽性細胞のみを選択しTET2安定発現細胞を樹立したのち、TET2の 発現はウエスタン解析またはRT-PCRで確認出来た。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
理由 プロ モーター領域の脱メチル化をバイサルファイトシーケンス法で解析し、GALR1やGALR2が再活性化されたことを確認する実験が遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
GALR1・GALR2の細胞周期停止作用やアポトーシス誘導作用の再現を目指し、その後は, p27, p16, TP53, PTENなどの他の遺伝子でも再活性化を確認することを目指している。癌抑制遺伝子の脱メチル化により甲状腺未分化癌の細胞死を誘導する機能が確認することが出来れば、本研究の最も重要な成果となる。また甲状腺未分化癌の不均一性についてTET2 遺伝子導入癌細胞のゲノムをFluidigm C1 single-Cell Auto Prep Systemにより1細胞ごとに単離・増 幅し次世代シーケンサーまたはdropletデジタル PCRでメチル化解析を行い，TET2が甲状腺未分化癌の不均一性の解消することを確認していく見込みである。
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