| 研究課題/領域番号 |
22K09676
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分56050:耳鼻咽喉科学関連
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
廣田 朝光 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (50435674)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2024年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | Aspergillus fumigatus / 網羅的遺伝子発現解析 / 遺伝的多様性 / RNAseq |
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| 研究開始時の研究の概要 |
環境真菌の一つである Aspergillus fumigatus (以下、Af) は、アレルギー性の上下気道疾患を引き起こす病原微生物としてよく知られている。下気道と異なり、上気道でのAfに対する応答については不明な点も多い。また、近年、Afに対する欧米人の気管支上皮細胞の応答性に遺伝的多様性が関わることが報告されている。本研究では、上気道でのAfに対する遺伝子応答の網羅的解析と日本人におけるAfに対する応答性の遺伝的多様性の検証を行う。これらの検証により、上下気道におけるAfの関与するアレルギー疾患の新たな予防法、治療法の開発へ繋がる新たな知見の創出を試みる。
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| 研究実績の概要 |
本研究は、不明な点の多い下気道のAspergillus fumigatus (以下、Af) に対する応答に着目し、以下の3点について検証を行う。
1. 鼻粘膜上皮細胞のAfに対する遺伝子応答の網羅的解析、2. 日本人におけるAfに対する応答性の遺伝的多様性の検証、3. Af特異的IgE抗体陽性、及び、陰性症例の擦過鼻粘膜上皮細胞の網羅的遺伝子発現解析
本年度は、1の鼻粘膜上皮細胞のAfに対する遺伝子応答の網羅的解析を行うため、気相液相界面培養法のパイロット実験として、気道上皮細胞を用いて培養細胞の分化誘導を行なった。STEMCELL TECHNOLOGIES社の分化誘導培地を使用することにより、分化誘導期間の短縮 (約30日 → 約20日)、分化誘導マーカー遺伝子発現のより強い増加 (FOXJ1, CCDC40など)、形態学的なより大きな変化 (繊毛数) を確認することができ、気相液相界面培養法を行う環境が整備された。今後、この手法を用いて、細胞を鼻粘膜上皮細胞に置き換え、分化誘導後にAfの刺激を行い、網羅的遺伝子発現解を行う。
また、3のAf特異的IgE抗体陽性、及び、陰性症例の擦過鼻粘膜上皮細胞の網羅的遺伝子発現解析を行うため、前年度に確立したブラシの擦過により上皮細胞の取得を行なった。既にAf特異的IgE抗体陰性症例は、Quality Controlをパスした十分な数の網羅的遺伝子発現解析を終了した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、気相液相界面培養法、また、分化誘導細胞の評価手法を構築することができた。構築した手法を用いて、Af刺激を行い、その後に必要な行程は、初年度から既に行なっている網羅的遺伝子発現解析なので障壁は少ないと思われる。
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| 今後の研究の推進方策 |
気相液相界面培養法のパイロット実験は終了したので、最終年度は、鼻粘膜上皮細胞を用いて分化誘導、Af刺激を行い、網羅的遺伝子発現解析を行う。Af特異的IgE抗体陽性の擦過鼻粘膜上皮細胞のサンプル数がまだ不十分なので可能な限り収集を行う。また、初年度に同定したミスセンスバリアントについて、サンプル数を増やしてgenotypingを行う。
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