| 研究課題/領域番号 |
22K09721
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分56050:耳鼻咽喉科学関連
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| 研究機関 | 千葉県がんセンター(研究所) |
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研究代表者 |
木下 崇 千葉県がんセンター(研究所), 頭頸科, 部長 (00648462)
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| 研究分担者 |
関 直彦 千葉大学, 大学院医学研究院, 准教授 (50345013)
花澤 豊行 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (90272327)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2024年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
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| キーワード | 口腔癌 / エクソソーム / 血清 / シークエンス / microRNA / 細胞外小胞 / マイクロRNA / 癌関連線維芽細胞 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
近年、癌細胞の悪性化獲得に際して、癌細胞の周辺に存在する癌関連線維芽細胞（CAF）の関与が注目されている。癌細胞とCAFは、それぞれ細胞外小胞にマイクロRNAを包括し、細胞外小胞を介して細胞間のコミュニケーションを取り合う事で、お互いの悪性化を助長していると考える。本研究では口腔扁平上皮癌(OSCC)とCAFの細胞外小胞から抽出したマイクロRNAの発現を網羅的に解析し、OSCCおよびCAFに核酸導入し、それぞれの細胞の悪性化の変化を調べる。
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| 研究実績の概要 |
まずは血清からエクソソームの表面に露出しているホスファチジルセリンに結合するT-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4（Tim4）を固相化したビーズを用いたキット（MagCaptur Exosome Isolation Kit PS）を使ってエクソソームの分離方法の最適化を行った。その結果血清1.5mlからsmall RNAシークエンスに使用するのに十分量のRNA収量が得られたため、引き続いて口腔癌患者の術前血清を用いてエクソソーム中のmicroRNAプロファイリングを行った。術後1年以上経過した症例の中で再発例5例と非再発例4例の血清からMagCapture Exosome Isolation Kit PSを用いてエクソソームの抽出を行った後にRNAを抽出しsmall RNAシークエンスを行った。シークエンスの結果、平均で14.9百万リードが得られ、そのうちmiRNA及びpiRNAにマップされた割合は平均58%であった。得られたシークエンス結果をTMM法にて正規化し、再発群と非再発群の比較を行い、再発群で有意に発現上昇を認めたmiRNAを同定した。これらmicroRNAについてTCGAのデータを用いて、頭頸部癌における予後の相関を検討した。その結果、miR-154およびmiR-763においては発現が高い群が有意に全生存率が低いことが明らかとなった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度途中で研究者が異動となったため新しい環境で研究を開始するために時間がかかったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は口腔癌の予後予測因子となるmiR-154およびmiR-763について細胞株を用いた機能解析の実験を行っていく予定である。
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