| 研究課題/領域番号 |
22K09766
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分56060:眼科学関連
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
松宮 亘 神戸大学, 医学研究科, 助教 (30707120)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
2024年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2023年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2022年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
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| キーワード | 脈絡膜 / YAP / 炎症 / 免疫 / マクロファージ / 肥満細胞 / 血管新生 / Hippo経路 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
Hippo経路における様々な遺伝子発現を調整するYAP (yes-associated protein)/TAZ (transcriptional coactivator with PDZ-binding motif)は「細胞の数」を調節し組織のサイズを決定しており、加齢黄斑変性の病態の素地である脈絡膜血管において発現が認められている。以前の我々の研究において、加齢黄斑変性の動物モデルによりYAP/TAZと炎症細胞（マクロファージ）の関連が示めされたため、本研究においては脈絡膜の炎症と免疫におけるYAP/TAZの役割を明らかにすることを目的としている。
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| 研究実績の概要 |
これまで脈絡膜血管新生におけるHippo経路の関与についての研究を行い、YAP阻害剤であるベルテポルフィン（VP）の投与が脈絡膜血管新生の抑制を示唆する結果が得られたことから、脈絡膜血管新生にHippo経路が関与していると推察されている。
脈絡膜の炎症と免疫におけるYAP/TAZの役割を明らかにするための研究について、C57BL/6Jマウスを用いて実験的自己免疫性ぶどう膜炎(exprimental autoimmune uveitis,EAU)モデルの作成し、網膜切片の作成を行いマクロファージのマーカーであるIba１抗体を用いて免疫組織染色（IHC）を行っている。
Cx3cr1-GFPマウスも準備は完了し並行して、EAUモデルマウス作成とIHCによるも網膜切片評価を行う予定である。
一方で、研究者は脈絡膜における炎症細胞のひとつである肥満細胞の役割に注目し、 ロイコトリエン受容体拮抗剤であるモンテルカストの滲出型加齢黄斑変性に対する保護作用について報告した(Matsumiya W, et al.Retina. 2023;43(11):1914-1921.)。TAZは肥満細胞、特にリソソームに発現し、ヒスタミン放出因子（HRF）と共局在していることが知られており(Song J,et al. Cell Biosci. 2024;14(1):60. )、脈絡膜の炎症と免疫反応におけるYAP／TAZの関与にあらたな可能性が示唆されている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
EAUモデルマウスの作成やCx3cr1-GFPマウスの準備はすすんでいるが、想定よりも時間を要したためやや遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
EAUモデルマウスを用いて抗Iba1抗体及び抗CD68抗体を用いてマイクログリア及びマクロファージの発現を確認をすすめる。余裕があればAnti-Mast Cell Tryptase 抗体及びCD107a（LAMP-1）抗体の染色を行い、コントロール群と比較して肥満細胞の数や脱顆粒の程度について調査したい。
Cx3cr1-GFPマウスへの準備され次第、脈絡膜へのレーザー照射（波長532nm、出力200mW、照射時間100ms、スポットサイズ100μm）を行いレーザー誘発脈絡膜新生血管を作成し、YAP阻害薬(ベルテポルフィン)及び偽薬をマウスの腹腔内に投与し、抗YAP抗体もしくは抗pYAP抗体によりYAPの発現とCx3cr1にGFPラベルされたマイクログリア及びマクロファージとの相関を評価を行う。
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