| 研究課題/領域番号 |
22K10014
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分57040:口腔再生医学および歯科医用工学関連
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
西澤 悟 東京大学, 医学部附属病院, 特任助教 (00646200)
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| 研究分担者 |
浅輪 幸世 東京大学, 医学部附属病院, 特任講師 (10769912)
星 和人 東京大学, 医学部附属病院, 教授 (30344451)
疋田 温彦 東京大学, 医学部附属病院, 特任教授 (60443397)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2024年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
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| キーワード | エクソソーム / 顎骨壊死 / 薬剤性顎骨壊死 / 間葉系幹細胞 / 再生医療 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
薬剤性顎骨壊死は骨吸収抑制薬の投与で発症する疾患であり、各方面から治療へのアプローチが試みられているが治療法の確立には至っていない。間葉系幹細胞から放出されるエクソソームは薬剤性顎骨壊死治療の新たなツールとして期待されている。エクソソームを治療のために使用するには、品質特性を規定し有効性および安全性を確認することが必要だが、未だ作用機序や責任因子も明確になっていない。本研究ではエクソソームを密度勾配遠心法により複数の分画に分類し疾患モデルマウスを用いて各分画の特性を評価する。こうして得られた知見をもとにエクソソームの薬剤性顎骨壊死治療作用における責任因子および作用機序を明らかにする。
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| 研究実績の概要 |
C57/BL6マウスの腹部から脂肪を採取し、酵素処理によって間葉系幹細胞を単離した。単離した細胞をウシ胎児血清添加培地で第３継代まで培養し凍結保存した脂肪由来間葉系幹細胞を本研究に使用した。脂肪由来間葉系幹細胞をウシ胎児血清添加培地で70～80%コンフルエントまで培養後、リン酸緩衝液で洗浄し、無血清培地に交換して24時間培養後に培養上清を回収した。この培養上清を密度勾配遠心法で5つのフラクションに分画し、各フラクションに含まれる小型細胞外小胞(small extracellular vesicles, sEVs)を超遠心法で分離精製した。このように各フラクションから精製したMSC-sEVsを既報の方法で作出した薬剤性顎骨壊死モデルマウスに尾静脈投与し、投与後3～30日の時点でマイクロCT撮影および血液検査をおこない、顎骨壊死の病変進行度、血清中の炎症マーカー値を評価し、30日の撮影後に安楽死させ、口腔粘膜ごと一括切除した上顎骨の組織学的評価をおこない、マイクロCT所見とあわせてMSC-sEVsの組織修復作用を評価することで、薬物性顎骨壊死に対する治療効果の高い小型細胞外小胞のフラクションを探し出す実験系を構築している。今後各フラクションのMSC-sEVに含まれるタンパク質およびmiRNAを解析し、小型細胞外小胞中に含まれるどの成分が薬剤性顎骨壊死治療の効果を有しているか調査する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の実験計画に沿って進捗していることから、（2）おおむね順調に進展している。と評価した。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初の実験計画に沿って研究を推進する。
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