| 研究課題/領域番号 |
22K10242
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分57070:成長および発育系歯学関連
|
|---|
| 研究機関 | 大阪大学 |
|---|
研究代表者 |
岡 綾香 大阪大学, 大学院歯学研究科, 助教 (20635403)
|
|---|
| 研究分担者 |
犬伏 俊博 大阪大学, 歯学部附属病院, 講師 (30550941)
山城 隆 大阪大学, 大学院歯学研究科, 教授 (70294428)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 390千円 (直接経費: 300千円、間接経費: 90千円)
2023年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2022年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
|
|---|
| キーワード | 硫酸イオン代謝異常 / 口唇口蓋裂 / Slc26a2遺伝子 / 硫酸代謝 / 頭蓋顎顔面の形態形成異常 / 硫酸イオン / 代謝異常 / 頭蓋顎顔面の形態異常 / 不正咬合 |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
口唇口蓋裂は先天性奇形の中でも最も頻度が高い難治性の疾患であり、遺伝的因子の他に複数の因子が関連した多因子性の疾患であると理解されている。しかし、口唇口蓋裂発症のメカニズムについては不明な点が多い。本研究では、口唇口蓋裂発症に関わる新たな因子として硫酸イオン代謝(硫酸イオンの取り込みとその利用)の異常に着目し、遺伝的要因または環境的要因として、どのように硫酸イオン代謝の異常が口唇口蓋裂をはじめとした顎顔面の形態形成や骨形成異常を引き起こすかを明らかにすることとした。
|
| 研究実績の概要 |
【目的】硫酸イオン代謝の異常が口唇口蓋裂をはじめとした顎顔面の形態形成や骨形成異常を引き起こすメカニズムの解明。
【方法】初代培養マウス間葉系細胞を採取し、in vitroでの解析を行った。レンチウイルスを用いてshRNA発現ベクターのトランスフェクションを行い、Slc26a2遺伝子のノックダウン細胞を作成した。Slc26a2遺伝子のノックダウン細胞と対象となるコントロール細胞からRNAを採取し、RNAシークエンス解析をした。
【結果・考察】RNAシークエンス解析の結果、Slc26a2遺伝子のノックダウン細胞では、Slc26a2遺伝子の発現の低下を確認した。Slc26a2遺伝子のノックダウン細胞に発現の低下が認められる遺伝子をエンリッチメント解析したところ、Go解析ではextracellular matrix organization、collagen fibril organization等の細胞が基質の組織化に関わる遺伝子や、細胞接着、骨石灰化に関わる遺伝子に加えcanonical Wnt signaling pathwayがエンリッチメントされていた。KEGG pathway解析では、ECM-receptor interaction、Focal adhesion、PI3K-Akt signaling pathway、Wnt signaling pathwayがエンリッチメントされていた。本結果より、Slc26a2遺伝子の発現低下により、細胞接着や古典的Wntシグナル経路の異常が引き起こされる可能性が示唆された。古典的Wntシグナル経路は頭蓋顎顔面の発生に必須な因子であり、口唇口蓋裂の発症にも関与していることが明らかになっており、Slc26a2遺伝子の機能喪失による硫酸イオン代謝の異常が引き起こす口唇口蓋裂をはじめとした顎顔面の形態形成や骨形成異常を説明できる可能性がある。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
マウス間葉系細胞を採取し、in vitroでの解析をスムーズに行うことができ、おおむね順調に進展していると考えられる。
|
| 今後の研究の推進方策 |
昨年度のRNAseq解析の結果、Wnt signaling pathwayがSlc26a2ノックアウトマウスでの口蓋裂を伴う頭蓋顎顔面の形態異常に起因している可能性考えられる。そのため、免疫組織化学的手法を用いて、Slc26a2のノックダウンがWnt signaling pathwayに及ぼす影響をin vivoにて検討する。さらに、口蓋突起間葉組織を採取し、in vitroでの検証実験を行うことで、Slc26a2欠失による硫酸代謝異常が頭蓋顔面の形態異常を引き起こす原因を明らかにしていく。
|
