研究課題/領域番号 |
22K11433
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分59010:リハビリテーション科学関連
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研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
研究代表者 |
掛橋 千彰 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 研究技術員 (80535683)
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研究分担者 |
舩橋 利也 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (70229102)
萩原 裕子 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (90468207)
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研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
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キーワード | Sema3a / 遅筋 / 速筋 / ケトン / Floxマウス / AAV / Cre / 骨格筋 / セマフォリン / Sama3A |
研究開始時の研究の概要 |
ケトン食の作用機序と有用性を動物実験により検証し、運動模倣食としてのケトン食という概念を提唱する。本研究では、ケトン食摂取後の骨格筋の筋線維組成、有酸素性代謝指標および全身レベルの持久能力を評価基準として、骨格筋の有酸素性代謝能改善の機序、Sema3A-KOマウスにおけるケトン食摂取の効果、ケトン食が個体の全身および筋持久力に及ぼす効果、を明らかにする。
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研究実績の概要 |
ケトン餌による骨格筋の遅筋化にSama3aが関与しているのかを明らかにすることを目的として、Sema3a floxマウスとACTA1 -Creマウスを掛け合わせて、骨格筋特異的にタモキシフェンでSama3aがknockoutされるマウスを作成することを試みた。しかし、Sama3aがknockoutされた筋繊維とそうでないものが混在する、つまり、キメラのほうが解析に有利と考え、AAVでCreを発現させることにした。こうすることによりAAVを発現した筋繊維ではSema3aがknockoutされ、発現していない筋繊維ではSama3aが機能している。したがって本年度は、1)骨格筋に発現するAAVベクターの探索、2)筋繊維タイプの解析、3)Sema3a floxマウスの導入、を行った。その結果、1)MyoAAV2A-.CMV.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40の作成、2)前脛骨筋(Tibialis anterior: TA)、長趾伸筋(Extensor digitorum longus: EDL),腓腹筋(Gastrocnemius: GC),ヒラメ筋(Soleus: SOL)を摘出する方法を確立し、Type Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx、laminin、Sema3aの3重蛍光免疫染色の最適化、3)Sema3a floxマウスの導入、を行った。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ケトン餌による遅筋化にSema3aが関わるのか、の解析のためのツールは全て整い、現在、遅筋化について解析を進めているので、全行程の25%程度は消化していると考えられるため。
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今後の研究の推進方策 |
今後は、Sema3Aのfloxマウスの腓腹筋にMyoAAV2A-.CMV.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40を発現させ、ケトン餌で飼育の前脛骨筋、長趾伸筋)ヒラメ筋の遅筋化を、Type Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx、の各筋繊維タイプの変化とSema3aの関係を解析する。
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