| 研究課題/領域番号 |
22K14994
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分42020:獣医学関連
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| 研究機関 | 大分大学 |
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研究代表者 |
君付 和範 大分大学, 医学部, 助教 (10829724)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円)
2024年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
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| キーワード | 狂犬病 / 末梢感染 / マウスモデル / リンパ節 / 宿主免疫 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
狂犬病ウイルスは低い複製効率と免疫回避機序によって宿主の局所免疫応答から免れている。所属リンパ節は免疫応答の場であり、この部位での免疫反応が免疫回避機序に関与している可能性がある。そこで、狂犬病ウイルス感染初期の所属リンパ節で特徴的な遺伝子発現を解析することで、免疫回避機序の一端を明らかにすることを本研究の目的とする。本研究では、低用量でも末梢感染が可能で病原性を発現する野外株あるいはその弱毒変異株を感染させたマウスモデルにおける発現遺伝子を比較することで特異的な遺伝子を特定する。これらの機序が解明されば、効果的な暴露前後治療方法の開発や発症前のバイオマーカーの発見に貢献できる可能性がある。
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| 研究実績の概要 |
狂犬病は数ヶ月に及ぶ長く不定な潜伏期間を経て発症する。潜伏期間中の狂犬病ウイルスは中枢神経系以外の末梢組織に潜伏していると推測されているが、その期間中のウイルスの挙動およびそれに対する宿主反応は未だ明らかにされていない。所属リンパ節は末梢組織における異物排除に関わるので、狂犬病感染の感染機序から考えても感染成立に関わる重要な組織であると考えられる。そこで本研究では、異なる病原性の狂犬病ウイルスを末梢感染させたマウスの感染初期所属リンパ節における宿主遺伝子発現を比較解析した。
強毒株である1088株（wt）あるいは本ウイルスをNA細胞で30代継代させて得られた弱毒株（N30）をBALB/cマウスの右足蹠に接種し、接種3、5日目の右膝窩リンパ節におけるウイルス遺伝子量、および血中中和抗体価（VNA）を比較したところ、接種3、5日目共にN30が有意に高い一方で、wtについては、接種日目においても基準値の0.5 IU/mL以下であった。また、同部位における狂犬病ウイルス遺伝子は接種3、5日目共にN30の方が有意に検出された。さらに、同部位における宿主反応を解析するため、mRNAseqにより遺伝子発現解析を実施したところ、発現差異が認められた遺伝子はそれぞれ接種3日目ではwtが744遺伝子、N30が1,036遺伝子、接種5日目では、wtが427遺伝子、N30が625遺伝子であった。Gene Set Enrichment Analysisでは、接種3日目で免疫経路に関連した複数の遺伝子セットが発現上昇していたのに対し、接種5日目のwtではinflammatory response、IL6 JAK STAT3 Signaling、TNFA Signaling via NFKBの遺伝子群が発現低下していた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
令和5年度の研究計画まで着手できたため、計画は順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
本年度の研究結果をもとに、1088株と1088-N30株あるいは、接種5日目と接種3日目で発現に違いが見られた遺伝子について、リアルタイムRT-PCRによる定量解析を実施する。加えて、次年度は1088株を末梢感染させたマウスの膝窩リンパ節を経日的に採取し、透明化組織を作成、抗狂犬病ウイルス抗体及び種々の細胞マーカー抗体を用いて膝窩リンパ節における狂犬病ウイルスの局在及び経日的な感染動態を確認する。透明化組織での検討が難しい場合に備えて、電子顕微鏡での観察も検討する。
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