| 研究課題/領域番号 |
22K15470
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分49060:ウイルス学関連
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
松井 千絵子 神戸大学, 医学研究科, 助教 (70778414)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2024年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
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| キーワード | シャペロン介在性オートファジー / エンドソームミクロオートファジー / C型肝炎ウイルス / Hsc70 / ウイルス複製 / HCV感染 / 蛋白質分解 / KFERQ配列 / KFERQ標的配列 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
C型肝炎ウイルス(HCV)は自身の増殖ための複製の場を確立するため、糖や脂質を利用する。そのため、宿主蛋白質の分解を誘導することで、HCV増殖に有利な環境を作り出し、病態形成を促進すると考えられる。シャペロン介在性オートファジー(CMA)分解に必須のシャペロンであるHsc70は、CMA以外にもエンドソームミクロオートファジー(eMI)に関与することが最新の研究で明らかになっている。そのため、HCV感染とCMAおよびeMIの解析により、HCV感染による新しい病原性発現機構の解明と治療法開発の端緒となることが期待できる。
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| 研究実績の概要 |
C型肝炎ウイルス(HCV)感染すると、細胞内シャペロン蛋白質Hsc70がHCV NS5A蛋白質と相互作用し、KFERQ配列を持つ宿主蛋白質をウイルス利便性のため、リソソーム系蛋白質分解経路を介して選択的に分解する。HCV感染により選択的オートファジー経路を介して分解を受ける宿主蛋白質は、リソソーム膜受容体LAMP-2Aと相互作用することでリソソームに取り込まれ分解される経路である、シャペロン介在性オートファジー(CMA)と、後期エンドソーム膜に取り込まれ、その後エンドソームとリソソームの融合により、リソソームで分解されるエンドソームミクロオートファジー(eMI)がある。しかしながら、HCV感染がどのようにCMAとeMIを使い分けるのか、両者の役割の違いは明らかではない。本研究では、HCV感染によるCMAとeMIの分別機構を解明する。
本年度はKFERQ配列を持つ宿主蛋白質が、HCV感染で蛋白質量の減少がみられるかをHCV感染実験とwestern blottingにて調べ、蛋白質量の減少がHsc70 siRNAまたはオートファジー阻害剤処理で回復するかを確認し、候補となる宿主因子を同定した。KFERQ標的配列に変異を入れたプラスミドを作製し、Hsc70による配列の認識が阻害されるのかを免疫沈降法にて解析し、さらに免疫蛍光染色法にてHsc70との局在を解析し、候補宿主因子のKFERQ配列がHsc70により認識されることを見出した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
HCV誘導性蛋白質選択的分解機構において、シャペロン蛋白質Hsc70が認識するKFERQ標的配列を有する宿主蛋白質において、HCV感染によるリソソーム依存性分解およびHsc70との相互作用、細胞内共局在を解析し、いくつか候補蛋白質を同定することができた。
候補となる新規標的蛋白質が、HCV感染で蛋白質量の減少がみられるかをHCV感染実験と、western blottingにて調べ、蛋白質量の減少がHsc70 siRNAまたはオートファジー阻害剤処理で回復することも確認できた。このことから、研究はおおむね順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
候補に挙がった蛋白質のうち、HCV感染によりCMA分解を受けるのか、あるいはeMI分解を受けるのかを絞り込む必要がある。CMA分解経路に必須であるLAMP-2Aと、eMI分解経路に重要なESCRT蛋白質に着目し、研究を進める。
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