| 研究課題/領域番号 |
22K15968
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
田中 宏典 徳島大学, 病院, 特任助教 (40792388)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円)
2023年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2022年度: 2,990千円 (直接経費: 2,300千円、間接経費: 690千円)
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| キーワード | apoptosis / 肝細胞癌 / 化学放射線療法 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
まず種々の肝癌細胞株に分子標的薬単独、X線単独、分子標的薬とX線の効果を明らかにし、各治療による殺細胞効果、アポトーシス誘導の有無(程度)、増殖抑制効果などを検討する。同様に、アポトーシス関連蛋白の変化を調べ、アポトーシスの機序を明らかにする。次いで、肝癌細胞株を用いて、アポトーシス関連遺伝子をsiRNAによりノックダウンすることにより、アポトーシスが増強または減弱するかどうかを検討し、薬剤感受性因子、耐性因子を明らかにする。さらに、ヌードマウスに肝癌細胞株を皮下移植し、TKI経口投与およびX線照射を行いこう腫瘍効果を調べるとともに、摘出腫瘍組織を用いてアポトーシス関連蛋白の変化を調べる。
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| 研究実績の概要 |
各肝癌細胞株(HuH-7, HepG2, Hep3B, PLC/PRF5, HLE, HLF)を96well plateに播種後、24時間後に種々の濃度のレンバチニブを添加、72時間後にWST-8 assayを用いて細胞生存率を評価したところ、レンバチニブの用量依存性に抗腫瘍効果が認められた。
同様に、細胞播種の翌日に種々の線量のX線を照射し、120時間後に細胞生存率を評価したところ、放射線の線量依存性に抗腫瘍効果を認めた。
次いで、最も抗腫瘍効果が高かったHuH-7細胞を用いて、播種翌日にレンバチニブの投与および放射線の照射を行い、120時間後に細胞生存率を評価したところ、いずれに対しても用量（線量）依存的に抗腫瘍効果が認められた。以上の結果をもとに併用治療のCombination indexを算出したところ、レンバチニブと放射線の組み合わせにおいてCI<1.0を示し、相乗効果が確認された。
続いて、抗腫瘍効果の機序についてアポトーシス誘導の有無をフローサイトメトリー法により評価したところ、コントロール群と比較してレンバチニブ単独群及び放射線単独群ではAnnexin V 陽性細胞率が高かった。さらに、併用群では4群の中で最もAnnexin V 陽性細胞率が高く、強いアポトーシス誘導が確認された。
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