研究課題/領域番号 |
22K16157
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研究種目 |
若手研究
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配分区分 | 基金 |
審査区分 |
小区分53020:循環器内科学関連
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研究機関 | 国立研究開発法人国立循環器病研究センター |
研究代表者 |
園田 桂子 国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 研究所, 上級研究員 (90824417)
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研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2024年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2023年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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キーワード | 不整脈原性右室心筋症 / 遺伝性心疾患 / DNA構造多型 / ロングリードシークエンス |
研究開始時の研究の概要 |
不整脈原性右室心筋症は、心室性不整脈と心不全を特徴とする遺伝性心疾患である。主たる原因は細胞間結合に関わる遺伝子(デスモソーム関連遺伝子)の変異であるが、実は変異が同定されていない患者が半数近く存在する。その理由の一つに、従来の検査法ではDNA構造多型(広範囲のDNAの欠失や重複など)を見落としていた可能性がある。本研究ではロングリードシークエンサーという新たな検査法を用いてデスモソーム関連遺伝子のDNA構造多型をスクリーニングし、今まで不明であったARVC患者の遺伝的背景を明らかにする。本研究の成果は、ARVC遺伝子検査の予後予測における有用性検証や新しい治療戦略開発へつながると考える。
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研究実績の概要 |
本研究は、ロングリードシークエンス (LRS) やMultiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) 法を用いてデスモソーム関連遺伝子のSVsをスクリーニングすることにより、今まで不明であった不整脈原性右室心筋症(ARVC)患者の遺伝的背景を明らかにすることを目的とする。 R4年度は、ショートリードによるターゲットシークエンスでは原因遺伝子変異が同定されなかったARVC発端者63人を対象に、MLPA法を用いてPKP2及び他のデスモソーム関連遺伝子の一部のエクソンについて、欠失・重複の有無をスクリーニングした。結果は、1名がPKP2エクソン8-14の欠失を有していた。本症例は症状を伴う心室性不整脈を発症しており、PKP2変異症例の特徴と合致していた。家系解析は現在施行中である。なお153名の中に既知のPKP2全エクソン欠失症例(Sonoda K, Europace 2017) が1名含まれているため、153人中2名(1.3%)がPKP2の欠失を有していたことになる。 続いて、DSG2のSVsをスクリーニングするために、ロングリードシークエンサーであるのナノポアシークエンサーを使用し、ターゲットシークエンス用のCas9プローブを設計した。オフターゲット等の問題によりCas9プローブ調整に時間を要したが、DSG2遺伝子全体をカバーできるようなCas9プローブの設計が完了した。R5年度はこのCas9プローブを用い、62人を対象にDSG2のSVsをスクリーニングを完了する予定である。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
R4中にDSG2のSVsスクリーニングを開始する予定であったが、ターゲットシークエンス用のCas9プローブ設計の調整に想定より時間を要してしまい、R5年度からの開始になってしまった。
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今後の研究の推進方策 |
R5年度中に、発端者63名を対象にナノポアシークエンサーを用いたターゲットシークエンスを完了する。さらにDSC2、DSP、JUPについてもターゲットシークエンス用のCas9プローブを設計し、スクリーニングを開始し、R6年度前半には完了させる。
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