• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

ヒト肝臓スフェロイドを用いた黄疸型レプトスピラ症の病態解明

研究課題

研究課題/領域番号 22K16381
研究種目

若手研究

配分区分基金
審査区分 小区分54030:感染症内科学関連
研究機関産業医科大学

研究代表者

宮原 敏  産業医科大学, 医学部, 講師 (50878329)

研究期間 (年度) 2022-04-01 – 2025-03-31
研究課題ステータス 交付 (2023年度)
配分額 *注記
4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円)
2024年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2023年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2022年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
キーワードレプトスピラ症 / スフェロイド / 肝細胞 / 感染症 / 肝臓スフェロイド / 黄疸 / 病原因子
研究開始時の研究の概要

レプトスピラ属細菌感染症のうち、黄疸型レプトスピラ症の予後は依然として悪く、不明な点の多い感染病態を解明することで、診断法、治療戦略の改良につなげることが求められる。我々はこれまでに、肝臓に到達したレプトスピラにより肝細胞結合が剥がされるというユニークな病態で黄疸が起こることを報告した。
本研究では、これまでの研究を発展させ、ヒト肝臓スフェロイドにレプトスピラを感染させるモデルを新たに確立し、①菌体の細胞への付着、②菌体の細胞間への侵入、③肝細胞結合の離開の現象に関与する、宿主細胞側、病原体側の因子および機序を明らかにする。そこから、新規の診断法や治療薬開発に実用化可能なシーズを探索する。

研究実績の概要

本研究では、in vivoに近い宿主-病原体相互作用を再現できるヒト肝臓スフェロイドにレプトスピラを感染させるモデルを新たに確立し、菌体の細胞への付着、侵入、肝細胞結合の離開の現象に関与する、宿主細胞側、病原体側の因子および機序を明らかにすることを目指す。2023年度までに比較的安価なラット初代肝細胞を用いて、肝細胞スフェロイドの培養環境、手技を既報に従って確立した。ラット肝細胞スフェロイドに病原性レプトスピラを感染させると、細胞表面に接着することが確認された。
また、既知の疾患モデルであるハムスターを使用して、病原性レプトスピラL495株感染後の肝臓における病理組織学的解析を行い、各種mRNA発現量を定量PCRで測定した。これにより動物感染モデルとスフェロイド感染モデルを比較し、妥当性を検討する上で必要な基礎的データを得ることができた。 ハムスター感染モデルで生じる筋病変について、浸潤する免疫細胞ではなく、菌体が筋肉に侵入することで筋線維の破壊が起こることを論文にまとめ、報告した。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

ラット初代肝細胞を使用して、スフェロイドの培養方法や感染実験、解析方法の確立を進めてきた。ヒト初代肝細胞は、予定より入手に時間がかかったが、国内メーカーより購入することができた。今年度、ヒト肝細胞スフェロイドを培養、感染実験を行い、予定していた研究を進めていく。

今後の研究の推進方策

ラット肝細胞で確立した手技を応用して、ヒト初代肝細胞を用いてスフェロイドを作成する。また、病原性レプトスピラL495株を感染させたスフェロイドを形態学的、生化学的に解析し、疾患モデルとしての妥当性を検証する。さらに菌体の肝細胞への接着、侵入に必要な因子、細胞結合の離開に関わる分子メカニズムについて解析をすすめる。

報告書

(2件)
  • 2023 実施状況報告書
  • 2022 実施状況報告書
  • 研究成果

    (12件)

すべて 2024 2023 2022

すべて 雑誌論文 (2件) (うち国際共著 1件、 査読あり 2件) 学会発表 (8件) (うち国際学会 2件) 図書 (2件)

  • [雑誌論文] Non-purulent myositis caused by direct invasion of skeletal muscle tissue by <i>Leptospira</i> in a hamster model2024

    • 著者名/発表者名
      Miyahara Satoshi、Mori Hiroshi、Fukuda Kazumasa、Ogawa Midori、Saito Mitsumasa
    • 雑誌名

      Infection and Immunity

      巻: 92 号: 2

    • DOI

      10.1128/iai.00420-23

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Protective role of stratum corneum in percutaneous Leptospira infection in a hamster model2023

    • 著者名/発表者名
      Asoh Tatsuma、Miyahara Satoshi、Villanueva Sharon Yvette Angelina M.、Kanemaru Takaaki、Takigawa Tomoya、Mori Hiroshi、Gloriani Nina G.、Yoshida Shin-ichi、Saito Mitsumasa
    • 雑誌名

      Microbial Pathogenesis

      巻: 182 ページ: 106243-106243

    • DOI

      10.1016/j.micpath.2023.106243

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり / 国際共著
  • [学会発表] Non-purulent myositis caused by direct invasion of skeletal muscle tissue by Leptospira in a hamster model.2024

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Miyahara
    • 学会等名
      The Biology of Spirochetes, Gordon Research Conference.
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] レプトスピラ感染症に対する国際共同研究の展開2023

    • 著者名/発表者名
      宮原敏
    • 学会等名
      第16回グローカル感染症研究セミナー
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] ハムスターを用いたJarisch-Herxheimer反応モデルの作製2023

    • 著者名/発表者名
      宮原敏、森博士、齋藤光正
    • 学会等名
      第59回レプトスピラ・シンポジウム
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] ハムスターモデルを用いたレプトスピラ症に伴う筋炎の病態解析2022

    • 著者名/発表者名
      宮原 敏、齋藤 光正
    • 学会等名
      第58回レプトスピラシンポジウム
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] レプトスピラ感染ハムスターモデルにおける消化管の解析と糞便からの同菌分離2022

    • 著者名/発表者名
      稲益良紀、二階堂靖彦、宮原 敏、丸岡 司、瀧川友哉、小川みどり、福田和正、齋藤光正
    • 学会等名
      第58回レプトスピラシンポジウム
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 深層学習モデルによる顕微鏡下凝集試験の凝集率推定とその応用2022

    • 著者名/発表者名
      中野里咲、小山田雄仁、尾鶴 亮、宮原 敏、吉村芳修、齋藤光正、廣松賢治
    • 学会等名
      第58回レプトスピラシンポジウム
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] ROLES OF MACROPHAGES ON THE PATHOGENESIS OF LEPTOSPIRA INFECTION- INDUCED MYOSITIS2022

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Miyahara, Mitsumasa Saito
    • 学会等名
      The 12th Meeting of The International Leptospirosis Society
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] DEEP LEARNING-BASED AGGLUTINATION RATE ESTIMATION FOR MICROSCOPIC AGGLUTINATION TEST2022

    • 著者名/発表者名
      ◎Risa Nakano, Yuji Oyamada, Ryo Ozuru, Satoshi Miyahara, Michinobu Yoshimura, and Kenji Hiromatsu
    • 学会等名
      The 12th Meeting of The International Leptospirosis Society
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [図書] 【腎臓症候群(第3版)-その他の腎臓疾患を含めて-】各種病態にみられる腎障害 感染症 レプトスピラ感染症(Weil病)2022

    • 著者名/発表者名
      齋藤 光正、丸岡 司、二階堂 靖彦、宮原 敏
    • 総ページ数
      5
    • 出版者
      (株)日本臨床社
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [図書] 【CLAPによる骨軟部感染抑制の実際】CLAPの構築方法 ゲンタマイシンの作用機序と薬剤耐性機構2022

    • 著者名/発表者名
      齋藤 光正、宮原 敏、安藤 恒平、善家 雄吉
    • 総ページ数
      6
    • 出版者
      (株)全日本病院出版会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書

URL: 

公開日: 2022-04-19   更新日: 2024-12-25  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi