| 研究課題/領域番号 |
22K16867
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分56040:産婦人科学関連
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
市川 智子 日本医科大学, 医学部, 助教 (10366726)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2027-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2024年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2026年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円)
2025年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円)
2024年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
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| キーワード | 流産 / グラニュライシン / ヘパリン / 免疫 / 不育症 / 炎症 / DOAC / 原因不明不育症 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
不育症は流産や死産を2回以上繰り返す疾患で、原因の約半数が原因不明であります。免疫細胞から分泌されるグラニュライシンは細胞死を誘導したり、炎症を引き起こすタンパク質です。本研究では、原因不明の不育症患者さんでグラニュライシンを測定し、グラニュライシンが原因不明不育症患者さんに特徴的なマーカーとなり得るのか。また、その背景を証明するために、基礎的な研究ではマウス用いて、グラニュライシンが流産過程においてどのように流産誘導に関与するのかを研究していきます。この研究により原因不明で治療ができなかった原因不明不育症患者さんが適切な治療を受け、出産できる可能性があります。
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| 研究実績の概要 |
＜グラニュライシンと流産との関連性＞ ①グラニュライシンが導入されたトランスジェニックマウスにLPSを投与し、流産を誘導したところ、WTと同様に流産を誘導したが、ヘパリンを＜ヘパリンの抗炎症作用による流産防止メカニズムの解析＞①ヘパリンはリポポリサッカライド（LPS）マウス流産を防止する：C57BL/6（メス） x C57BL/6（オス）の同種同型組み合わせ妊娠において、LPSを腹腔内投与するとマウス流産が誘導されるが、未分画ヘパリンの皮下投与により流産が有意に防止できることを見出した。この際PT、APTTの凝固時間には影響を及ぼさないことも確認した。すなわち、凝固系に影響を及ぼさないレベルのヘパリン量により、有意に流産防止効果を発揮することを見出した。②未分画ヘパリン投与は、胎盤内の炎症性環境を抑制する：上記のヘパリン投与において、フローサイトメーター（FCM）を用いて子宮局所の免疫細胞解析を行なったところ、抗炎症作用を有するM2型マクロファージ分画の増加および炎症性サイトカインおよびパーフォリン、グランザイムなどの細胞障害性因子の産生抑制を認めた。さらにELISA法によりマウス血清中のサイトカインを測定したところ、同じくヘパリン投与により炎症性サイトカイン濃度の低下を認めた。また、脱落膜 mRNAのT-betはヘパリンで有意に低下した。以上より、ヘパリン投与は全身、局所の過剰炎症を抑制することが示唆されている。
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| 現在までの達成度 |
現在までの達成度
2: おおむね順調に進展している
理由
グラニュライシンは齧歯類には存在しないため、グラニュライシンが導入されたトランスジェニックマウスを作成した。グラニュライシントランスジェニックマウスにLPSを投与し流産率をWTと比較したところ、WTと同等の流産率であった。また、LPSにヘパリンを追加して投与した場合も、WTと同様の流産率であった。脱落膜細胞の転写因子である、T-betやGATA-3もWTと同様の変化であり、LPSとヘパリンの同時投与でもWTと同様の変化であった。よって、LPSが誘導する流産系については、グラニュライシンの関与が明らかとならなかった。
そこで、視点を変えて、D0AC(Dietary Oral Anticoagulant)をマウスに投与し、流産予防効果があるか調査することとした。DOACをLPSと同時に投与することにより、ヘパリンに比べ有意に流産を防止することが明らかとなった。また、脱落膜の免疫細胞をフローサイトメトリーを用いて確認すると、ヘパリンが自然免疫を変動するのに対し、DOACは獲得免疫を中心に変動させていることが明らかとなった。脱落膜の転写因子のt-betはヘパリンと同様に、低下していることが明らかとなった。
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| 今後の研究の推進方策 |
LPS誘導流産マウスに対し、アピキサパンは流産を防止することが明らかとなった。また、その流産抑制はヘパリンより強いことが示された。アピキサパンは凝固因子の第10因子を選択的に抑制するため、第10因子がLPSで実際どれくらい上昇し、アピキサパンで低下するか評価する。また、第10因子と血管内皮障害との関係性を調べるために、活性化第10因子を妊娠マウスに投与し、血小板数を評価して血管内皮障害の状況を調べたり、原因不明不育症患者の第10因子活性を測定し、第10因子と流産についての関係性を調査していく。
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