研究課題
若手研究
応募者は、口腔がん細胞において高発現する長鎖noncoding RNA (lncRNA)としてDLEU1 (deleted in lymphocytic leukemia 1)を同定した。本研究は、口腔がんにおけるDLEU1の分子機能および臨床的意義を明らかにし、新たな治療法の開発につなげることを目的とする。そのために、(1) DLEU1が口腔がん細胞のIFNシグナルを活性化するメカニズムを明らかにする、(2) DLEU1によるヒストン修飾変化のメカニズムおよびその機能的意義を解明する、(3) DLEU1が腫瘍免疫に与える影響を解析し、治療への応用可能性を明らかにする。
口腔がん細胞におけるDLEU1の分子機能を明らかにするため、口腔がん細胞株を用いてDLEU1をsiRNAでノックダウンし、遺伝子発現をマイクロアレイ解析し、ヒストン修飾をクロマチン免疫沈降シークエンス(ChIP-seq)で解析した。ヒストン修飾は、転写活性化マーカーであるヒストンH3リジン4トリメチル化(H3K4me3)と、ヒストンH3リジン27アセチル化(H3K27ac)を解析対象とした。ChIP-seq解析の結果、DLEU1ノックダウンによりゲノムワイドなH3K27acレベルの低下を認めた。H3K27acレベルが変化した遺伝子を抽出し、Gene Ontology解析およびPathway解析を行った結果、インターフェロン応答や免疫応答に関わる遺伝子が有意にエンリッチしていることが明らかとなった。IFIT1、IFITM1、IFI6など代表的なインターフェロン応答遺伝子を選択し、H3K27acレベルをChIP-qPCRで再検証した結果、DLEU1ノックダウンによる低下が確認された。また遺伝子発現マイクロアレイの結果をGene Set Enrichment Analysisで解析した結果からも、DLEU1ノックダウンによりインターフェロン応答に関わる遺伝子セットの有意な発現低下が確認された。これらの結果は、複数の口腔がん細胞株を用いた定量RT-PCRからも確認された。さらにDLEU1ノックダウンによりINFAR1やIFNGR2などインターフェロン受容体の発現が抑制されることを定量RT-PCRから明らかにした。以上の結果から、DLEU1が口腔がん細胞のインターフェロン応答を活性化することを明らかにした。
2: おおむね順調に進展している
口腔がん細胞におけるDLEU1の分子機能を明らかにするためのトランスクリプトームデータとエピゲノムデータを取得することができた。それらのデータを統合解析した結果、DLEU1が口腔がん細胞のエピゲノムに作用すること、そしてインターフェロン応答シグナルを活性化することを明らかにすることができた。
さらに複数の口腔がん細胞株を用いて、トランスクリプトーム・エピゲノムデータを収集する。それらのデータのバイオインフォマティクス解析を行い、DLEU1の分子機能の推測を行う。またDLEU1の下流標的遺伝子候補を同定し、口腔がん細胞を用いて機能解析を行う。
すべて 2023 2022
すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (1件)
Cancer Med.
巻: 12 号: 5 ページ: 5953-5963
10.1002/cam4.5392
