| 研究課題/領域番号 |
22K19433
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| 研究種目 |
挑戦的研究(萌芽)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
中区分49:病理病態学、感染・免疫学およびその関連分野
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
森井 英一 大阪大学, 大学院医学系研究科, 教授 (10283772)
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| 研究期間 (年度) |
2022-06-30 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円)
2024年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
2023年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
2022年度: 2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
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| キーワード | 慢性炎症 / 脂肪組織 / RNA-seq / 遺伝子単離 / 脂肪細胞 / 病理組織 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
クローン病組織検体を用いて、漿膜下脂肪組織よりRNAを抽出し遺伝子発現解析を複数症例にて行う。発現量に変動のある候補遺伝子がコードするタンパク質の発現を免疫組織化学的にて、またRNA発現をin situ hybridization法にて解析し、どの細胞で遺伝子発現変化があるか明らかにする。同じ組織切片中に存在する脂肪細胞の大きさにより発現が異なる因子が重要であることからも解析過程で脂肪細胞の大きさで変化する因子にも着目する。解析対象遺伝子を細胞株でノックダウンあるいは強制発現させ細胞動態に対する影響を調べ脂肪細胞のサイズと慢性炎症との関連性を解析する。
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| 研究実績の概要 |
クローン病を再発しやすい病巣と再発しにくい病巣を比較して、壁外脂肪組織の細胞の大きさに違いがあることをこれまで報告した。再発しやすい症例の場合、脂肪細胞の大きさが小さくなるadipose shrinkageという現象がみられる。そこで、壁外である漿膜下脂肪組織がどのように慢性炎症に関与するか検討するため、再発症例10例、非再発症例10例の病理組織検体より、壁外脂肪組織をマクロダイセクションして、RNA-seq解析を行い、adipose shrinkageに関連する遺伝子を検索した。現在のところ、再発症例で発現が低下する遺伝子群として41遺伝子が単離されている。これらの遺伝子群は再発を抑制する方向にある遺伝子である。遺伝子とタンパク質とは挙動が異なる可能性もあり、Proteomicsデータベースより、41遺伝子のコードするタンパク質が脂肪組織に発現しているかどうかを次に検討した。その結果、41種類のタンパク質の中で9種類のタンパク質が脂肪組織に発現していることがわかった。この9種類のタンパク質の中で、これまでクローン病との関連が報告されているものは4種類であった。このことは今回の解析がある程度、クローン病と関連した因子を抽出することに成功していることを示唆する。また残りの5種類のタンパク質は、これまでクローン病との関連が報告されておらず、新規のクローン病関連因子を同定することにつながる可能性もある。今後は、実際の病理検体において、今回単離されたタンパク質群が本当に発現に差があるのか、免疫組織化学的に検索を進める予定である。そのためには免疫染色が可能な抗体が必要となる。現在、これらの抗体を入手し、免疫染色を進める準備を行っている。また場合によっては、遺伝子発現レベルを検討するために、in situ hybridizationを施行することも検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
再発症例と非再発症例よりRNA-seqを実施し、発現に差のある遺伝子を単離することができている。またそのいくつかはこれまでクローン病と関連することが報告されており、本解析が正しい方向で行われていることが示唆されている。また、クローン病との関連を報告されていない遺伝子も多数単離されており、新たな研究の糸口にたどり着いていると言える。
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| 今後の研究の推進方策 |
実際の病理検体において、今回単離されたタンパク質群が本当に発現に差があるのか、免疫組織化学的に検索を進める予定である。そのためには免疫染色が可能な抗体が必要となる。現在、これらの抗体を入手し、免疫染色を進める準備を行っている。また場合によっては、遺伝子発現レベルを検討するために、in situ hybridizationを施行することも検討している。さらに、現在のところは再発症例で発現低下を示す遺伝子のみが単離されているが、逆に再発症例で発現亢進を示す遺伝子も、さらに症例数を積み重ねることで単離することを計画している。
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