| 研究課題/領域番号 |
22K20570
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| 研究種目 |
研究活動スタート支援
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
0601:農芸化学およびその関連分野
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
中島 史恵 名古屋大学, 生命農学研究科, 助教 (60961612)
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| 研究期間 (年度) |
2022-08-31 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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| キーワード | 5-リポキシゲナーゼ / シクロオキシゲナーゼ-2 / トロンボキサン合成酵素 / 生理活性脂質 / エイコサノイド / シクロオキシゲナーゼ / リポキシゲナーゼ / アラキドン酸 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
アラキドン酸は、リポキシゲナーゼ (LOX) 経路もしくはシクロオキシゲナーゼ (COX) 経路の２つの古典的経路によりエイコサノイドへと代謝され、炎症や組織の恒常性維持において中心的役割を果たす。しかし、慢性炎症性疾患の発症を既知のエイコサノイドの生合成阻害では完全に抑制できないことから、古典的経路で生合成されるエイコサノイドだけでは全ての生体応答を説明することができず、アラキドン酸代謝経路の全容解明が求められている。そこで本研究では、”5-LOX/COX-2クロストーク”により生成される新規エイコサノイドの探索と、その生理活性の解明を目指す。
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| 研究実績の概要 |
5-OH-thromboxane B2の生成を評価するin vitroの系として、4日間薬剤処理を行うことで成熟顆粒球へと分化誘導したHL-60 (dHL-60) を用いた。ウェスタンブロッティングによるタンパク質の発現解析により、dHL-60は5-リポキシゲナーゼ、トロンボキサン合成酵素を恒常的に発現しており、さらにLPS刺激依存的にシクロオキシゲナーゼ-2の発現が誘導されることを確認した。そこで、5-リポキシゲナーゼ、トロンボキサン合成酵素およびシクロオキシゲナーゼ-2を発現するdHL-60細胞が産生するエイコサノイドを評価するため、質量分析装置を用いた分析を行った。その結果、刺激依存的に、基質であるアラキドン酸の増加に加え、シクロオキシゲナーゼ-2により産生されるprostaglandin E2およびprostaglandin D2、トロンボキサン合成酵素により産生されるthromboxane B2、さらに5-リポキシゲナーゼにより産生されるleukotriene B4の生成が認められた。
Thromboxane B2と光増感剤であるメチレンブルーを4℃にて一晩反応させることで一重項酸素付加反応により作成した5-OH-thromboxane B2を標品とし、dHL-60細胞における5-OH-thromboxane B2の産生を評価したところ、LPS刺激依存的に標品5-OH-thromboxane B2と一致するピークの形成が認められたことから、5-リポキシゲナーゼ、シクロオキシゲナーゼ-2、トロンボキサン合成酵素の３つの酵素を発現する成熟顆粒球において5-OH-thromboxane B2が産生される可能性が示唆された。
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