研究課題/領域番号 |
22K20911
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研究種目 |
研究活動スタート支援
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配分区分 | 基金 |
審査区分 |
0903:器官システム内科学およびその関連分野
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研究機関 | 新潟大学 |
研究代表者 |
池上 龍太郎 新潟大学, 医歯学系, 助教 (20815360)
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研究期間 (年度) |
2022-08-31 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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キーワード | 不安定プラーク / 自家蛍光 / マクロファージ / リソソーム / 炎症性サイトカイン |
研究開始時の研究の概要 |
安定狭心症に対する経皮的冠動脈形成術は生命予後を改善しないことが報告され、冠動脈プラークの破綻リスクに応じた新しい治療パラダイムの創出が望まれている。近赤外線自家蛍光法(NIRAF)を用いた血管内イメージングは、不安定プラークの診断に有用であることが報告されているが、不安定プラークが自家蛍光を発するメカニズムや病態的意義は十分に解明されていない。本研究では、不安定プラークに存在する自家蛍光粒子の発生メカニズムと病態的意義を明らかにすることでNIRAFの診断的意義を確立し、自家蛍光の抑制を糸口とした新しいアプローチの動脈硬化治療法の開発を目指す。
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研究実績の概要 |
2022年度は、自家蛍光発生細胞(THP-1マクロファージ様細胞に酸化LDLを添加し5日間培養)を用いて自家蛍光発生のメカニズム解明を目的としたIn vitroの実験に取り組んだ。自家蛍光発生には、リソソーム機能不全、オートファジー不全を背景としているという仮説に基づき、qPCR、ウェスタンブロットでリソソーム・オートファジー関連因子の発現を解析した。自家蛍光発生マクロファージでは、酸化LDLを添加して48時間培養した通常の泡沫化マクロファージ(自家蛍光発生なし)と比べ、LAMP1、LAMP2、Atg7のmRNA発現は低下していた。また、LAMP1、LAMP2、LC3を標的としたウェスタンブロットでも、これら蛋白の発現は低下する傾向が見られた。酸化LDLを添加すると、脂質分解のため、リソソーム・オートファジー機能は亢進するが、次第に機能低下を来し自家蛍光発生のフェーズでは関連蛋白の発現は低下していると考えられた。現在、リソソーム機能阻害、賦活化薬を用いた自家蛍光発生の変化とリソソーム機能の解析を行っている。また、自家蛍光発生マクロファージでは、炎症関連蛋白(TNFa, CCL20)のmRNAの発現が48時間培養の泡沫化マクロファージと比べ低下していた。サイトカイン合成能は低下し、より細胞死に近づいている状態を反映していると考えられた。プラーク内環境における自家蛍光発生マクロファージの意義について、さらに検証を進めていく。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
これまでのところ仮説通りの結果が得られているが、細胞培養インキュベーターの故障などにより、実験を中断せざるを得ない時期があった。
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今後の研究の推進方策 |
今後は、自家蛍光発生細胞のリソソーム・オートファジー機能についてさらに解析を進めると共に、サイトカインなどの分泌因子を中心とした解析を行う。分泌因子の網羅的解析を行い、プラーク進展に役割を果たす新規性のある分泌因子がないか、検討を行う。また、超遠心法を用いて自家蛍光粒子を抽出し、血管構成細胞への影響を検証する。
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