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生体外における酵素反応場の作製による会合体形成過程の解明

研究課題

研究課題/領域番号 22KJ3015
補助金の研究課題番号 21J22995 (2021-2022)
研究種目

特別研究員奨励費

配分区分基金 (2023)
補助金 (2021-2022)
応募区分国内
審査区分 小区分37010:生体関連化学
研究機関立命館大学

研究代表者

廣瀬 光了 (2022-2023)  立命館大学, 生命科学研究科, 特別研究員(DC1)

廣瀨 光了 (2021)  立命館大学, 生命科学研究科, 特別研究員(DC1)

研究期間 (年度) 2023-03-08 – 2024-03-31
研究課題ステータス 採択後辞退 (2023年度)
配分額 *注記
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
2023年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2022年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2021年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
キーワード色素 / クロロフィル / 酵素 / 有機合成 / 生合成・代謝経路 / 生合成過程
研究開始時の研究の概要

今まで行われた生体外での酵素反応系では、1種類の酵素が1種類の基質と反応して得られた1種類の反応後生成物しか確認できないため、酵素の制御機構(2種類以上の生合成酵素同士の関係性や色素が生合成される時の基質と酵素の反応機構など)を含む生理学は不明であった。そこで、脂質に固定化させた複数の酵素が連続的反応を行う酵素反応場を作成し、一連の生合成経路を再現する。これにより、複数の酵素同士が協力して得られる生成物や酵素反応性などを検討して、酵素間の関係性を解明する。さらに再現された生合成経路で合成された色素が色素運搬タンパク質WSCPと協同して、精密に配向した会合体を形づくるのかどうかも確認する。

研究実績の概要

本研究の第一目的としていた「クロロフィル生合成過程に関わる酵素の反応機構の解明」については、既に達成することができた。生体外の酵素反応だけではなく、計算科学の分野も組み合わせることで、標的酵素の反応機構(アミノ酸残基を含めた)を分子レベルで解明することができた。これらの研究成果を取りまとめ、国内の学会で2件の発表を行うことができた。さらに、その研究内容を取りまとめた論文が査読付き国際学術誌に掲載された。
本研究の第二目的としていた「酵素の制御機構(生合成酵素の基質特異性から推測する反応機構や2種類以上の酵素同士の関係性)を含む生理学の解明」に努めた結果、クロロフィル色素の生合成経路に関わる酵素の反応機構を分子レベルで推定でき、国内外の学会で2件の発表を行えただけでなく、その内容の論文が査読付き国際学術誌に掲載された。
また、本研究で培った技術や知識に基づいて、様々な方向性へ研究展開を行った。その結果、新規のクロロフィル(誘導体)の合成と同定を達成することができた。さらに、多数の(非)天然クロロフィル色素の微量分析を行い、分析による同定プロファイルを作成することもできた。加えて、クロロフィル代謝過程で働く重要な酵素についても新たな知見を得ることができた。以上のそれぞれの研究内容について、共著者として国内の学会発表4件に貢献できた。また、それらの研究内容を取りまとめた論文が2報、査読付き国際学術誌に掲載された。

現在までの達成度 (段落)

翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。

今後の研究の推進方策

翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。

報告書

(2件)
  • 2022 実績報告書
  • 2021 実績報告書
  • 研究成果

    (20件)

すべて 2023 2022 2021 その他

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件) 学会発表 (14件) (うち国際学会 4件、 招待講演 2件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] In vitro reversible dehydration in C3-substituents of zinc chlorophyll analogs by BchF and BchV enzymes: Stereoselectivity and substrate specificity in the dehydration2023

    • 著者名/発表者名
      Hirose Mitsuaki、Tsukatani Yusuke、Harada Jiro、Tamiaki Hitoshi
    • 雑誌名

      Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics

      巻: 1864 号: 2 ページ: 148959-148959

    • DOI

      10.1016/j.bbabio.2023.148959

    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Chiral-phase HPLC separation of (divinyl-)protochlorophyllide-a enantiomers as key precursors in chlorophyll biosynthesis from their 132-stereoisomeric prime forms2023

    • 著者名/発表者名
      Shiozaki Mai、Mizoguchi Tadashi、Harada Jiro、Hirose Mitsuaki、Tamiaki Hitoshi
    • 雑誌名

      Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics

      巻: 1864 号: 2 ページ: 148960-148960

    • DOI

      10.1016/j.bbabio.2023.148960

    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Predicted Structure of the BciC Enzyme Catalyzing the Removal of the C132-Methoxycarbonyl Group for Biosynthesis of Chlorosomal Chlorophylls: A Mechanism for Dual Catalytic Functions of Hydrolysis and Decarboxylation inside Its Active Site2023

    • 著者名/発表者名
      Hirose Mitsuaki、Harada Jiro、Kashiyama Yuichiro、Tamiaki Hitoshi
    • 雑誌名

      Biochemistry

      巻: 62 号: 9 ページ: 1443-1451

    • DOI

      10.1021/acs.biochem.2c00715

    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Characterization of regioisomeric diterpenoid tails in bacteriochlorophylls produced by geranylgeranyl reductase from Halorhodospira halochloris and Blastochloris viridis2022

    • 著者名/発表者名
      Hirose Mitsuaki、Tsukatani Yusuke、Harada Jiro、Tamiaki Hitoshi
    • 雑誌名

      Photosynthesis Research

      巻: 154 号: 1 ページ: 1-12

    • DOI

      10.1007/s11120-022-00938-3

    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Physicochemical and biochemical properties of synthetic zinc 131-(un)substituted chlorophyll-a derivatives2021

    • 著者名/発表者名
      Hirose Mitsuaki、Harada Jiro、Maeda Hiroaki、Tamiaki Hitoshi
    • 雑誌名

      Tetrahedron

      巻: 88 ページ: 132151-132151

    • DOI

      10.1016/j.tet.2021.132151

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] 3位または8位置換クロロフィル誘導体を用いた生体外でのSGR酵素反応とその基質特異性2023

    • 著者名/発表者名
      佐藤颯真, 廣瀨光了, 田中亮一, 伊藤寿, 民秋均
    • 学会等名
      第64回植物生理学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] 3位のビニル基の水和を触媒するBchFとBchVによる亜鉛バクテリオクロロフィリドdとそのホモログ体の脱水反応とその応用2023

    • 著者名/発表者名
      廣瀨 光了, 塚谷 祐介, 原田 二朗, 民秋 均
    • 学会等名
      第64回植物生理学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] プロティストによるクロロフィル類の構造・機能改変2023

    • 著者名/発表者名
      民秋均, 埜村颯, 廣瀨光了, 柏山祐一郎
    • 学会等名
      日本化学会第103回春季年会
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] π共役型E環縮環クロロフィル誘導体の合成と物性2023

    • 著者名/発表者名
      民秋均, 山下謙真, 廣瀨光了
    • 学会等名
      日本化学会第103回春季年会
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] BciC酵素による加水分解と脱炭酸反応の推定機構2023

    • 著者名/発表者名
      廣瀨 光了, 原田 二朗, 柏山祐一郎, 民秋 均
    • 学会等名
      日本化学会第103回春季年会
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] 好塩性光合成細菌のゲラニルゲラニル還元酵素による不完全な還元反応2022

    • 著者名/発表者名
      塚谷 祐介、廣瀨 光了、原田 二朗、民秋 均
    • 学会等名
      第12回光合成学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] クロロフィル生合成系:酸化還元酵素BchC存在下で加速されるBchF水和反応の解明2022

    • 著者名/発表者名
      廣瀨 光了、塚谷 祐介、原田 二朗、民秋 均
    • 学会等名
      第29回光合成セミナー2022
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] 緑色硫黄細菌の色素合成経路ではたらくC132位メトキシカルボニル基脱離酵素BciCのAlphaFold2解析による構造解析と生化学的解析からの反応機構の検証2022

    • 著者名/発表者名
      廣瀨光了, 原田二朗, 柏山祐一郎, 民秋均
    • 学会等名
      第13回藍藻の分子生物学2022
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] A BchF enzyme catalytically dehydrates a 1-hydroxyethyl group at the C3-position in zinc bacteriochlorophyll-d derivatives2022

    • 著者名/発表者名
      Mitsuaki Hirose, Yusuke Tsukatani, Jiro Harada, Hitoshi Tamiaki
    • 学会等名
      SNCPP22
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] 有機合成法でアプローチする生体外におけるBciC酵素反応の基質特異性の検討2022

    • 著者名/発表者名
      廣瀨 光了、原田 二朗、民秋 均
    • 学会等名
      第一回原核光合成生物シンポジウム
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] バクテリオクロロフィルc,d,e 分子の生合成経路で働くBciC 酵素反応機構の解明2021

    • 著者名/発表者名
      廣瀨 光了、原田 二朗、民秋 均
    • 学会等名
      第11回光合成学会年会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] BciC enzymatic reactions of synthetic zinc 131-(un)substituted chlorophyll a derivatives2021

    • 著者名/発表者名
      Mitsuaki Hirose, Jiro Harada, Hiroaki Maeda, Hitoshi Tamiaki
    • 学会等名
      SNCPP21
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] Physico- and biochemical properties of synthetic zinc 131-(un)substituted chlorophyll-a derivatives2021

    • 著者名/発表者名
      Mitsuaki Hirose, Jiro Harada, Hiroaki Maeda, Hitoshi Tamiaki
    • 学会等名
      Tetrahedron Symposium
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Elucidation of BciC enzymatic reaction mechanism2021

    • 著者名/発表者名
      Mitsuaki Hirose, Misato Teramura, Jiro Harada, and Hitoshi Tamiaki
    • 学会等名
      Pacifichem 2021
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 国際学会
  • [備考] 葉緑素(クロロフィル)の生合成に関わる酵素の反応機構を分子レベルで解明

    • URL

      https://www.ritsumei.ac.jp/profile/pressrelease_detail/?id=836

    • 関連する報告書
      2022 実績報告書

URL: 

公開日: 2021-05-27   更新日: 2024-03-26  

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