複製ストレスによる複製フォーク複合体の変動と細胞応答機構の解析

• 研究課題/領域番号: 23570243
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 細胞生物学
• 研究機関: 公益財団法人東京都医学総合研究所
• 研究代表者: 吉沢 直子 (須賀田 直子 / 吉沢 直子(須賀田直子)) 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 主任研究員 (30344071)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 5,460千円 (直接経費: 4,200千円、間接経費: 1,260千円); 2013年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2012年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円); 2011年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
• キーワード: ゲノム不安定性 / 多能性幹細胞 / 初期胚 / 複製フォーク / 複製ストレス / ES細胞 / AND-1 / Tipin / Rif1 / クロマチン免疫沈降 / 胎生幹細胞 / Timeless / DNA修復 / 未分化

研究概要

ヒトフォーク因子複合体はS期のクロマチン画分でリン酸化型Mcm4を特異的に含むことを見出した。次に、マウスES細胞で発現解析したところ、フォーク因子や複製タイミング制御因子Rif1が高発現していた。発現抑制の実験などにより、Rif1の発現はES細胞の自然分化を抑制しiPS細胞の形成効率に必要である一方、多能性を亢進する二細胞期の遺伝子群を抑制するという双方向の作用を持つことがわかった。また、Rif1が分化誘導において重要な遺伝子のプロモーター領域に結合することも見出した。

研究成果

• [雑誌論文] Cell cycle synchronization and flow cytometry analysis of mammalian cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa-Sugata, N. and Masai, H.
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology 巻: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of multifunctional transcription factor TFII-I and putative tumour suppressor DBC1 in cell cycle and DNA double strand damage repair (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanikawa M, Wada Hiraike O, Yoshizawa Sugata N , Shirane A, Hirano M, Hiraike H, Miyamoto Y, Sone K, Ikeda Y, Kashiyama T, Oda K, Kawana K, Katakura Y, Yano T, Masai H, Roy AL, Osuga Y, Fujii T
  • 雑誌名: Br. J. Cancer 巻: 109 ページ: 3042-8
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of multifunctional transcription factor TFII-I and putative tumour suppressor DBC1 in cell cycle and DNA double strand damage repair (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanikawa, M., Wada-Hiraike, O., Yoshizawa-Sugata, N., Shirane A, Hirano M, Hiraike H, Miyamoto, Y., Sone, K., Ikeda, Y., Kashiyama, T., Oda K, Kawana K, Katakura Y, Yano T, Masai, H., Roy AL, Osuga, Y. and Fujii, T.
  • 雑誌名: Br. J. Cancer. 巻: 109 号: 12 ページ: 3042
  • DOI: 10.1038/bjc.2013.532
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] EBNA1-dependent recruitment of Orc on OriP of Epstein-Barr virus with purified proteins : Stimulation by Cdc6 through Its direct interaction with EBNA1 (2012)
  • 著者名/発表者名: Moriyama K, Yoshizawa Sugata N, Obuse C, Tsurimoto T, and Masai H
  • 雑誌名: Biological Chemistry 巻: 287 ページ: 23977-23994
  • 査読あり
• [雑誌論文] Epstein-Barr nuclear antigen 1 (EBNA1)-dependent recruitment of origin recognition complex(Orc) on oriP of Epstein-Barr virus with purified proteins:stimulation by Cdc6 through its direct interaction with EBNA1. (2012)
  • 著者名/発表者名: Moriyama K
  • 雑誌名: The Journal of biological chemistry 巻: 287 号: 28 ページ: 23977-23994
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.368456
  • 査読あり
• [学会発表] Rif1のES細胞での未分化能維持、および体細胞のリプログラミングにおける機能解析、クロマチン構造制御因子としての可能性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 吉沢直子, 正井久雄
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸(ポスター発表)
• [学会発表] Rif1のES 細胞での未分化能維持、および体細胞のリプログラミングにおける機能解析:クロマチン構造制御因子としての可能性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 吉沢 直子,正井 久雄
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Rif1はクロマチン高次構築を制御してES細胞特異的な核内構造を形成する (2012)
  • 著者名/発表者名: 吉沢直子, 覚正直子, 山崎聡, 深津理乃, 正井久雄
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会ワークショップ
  • 発表場所: 福岡(口頭発表およびポスター発表)
• [学会発表] The maintenance of undifferentiated state in mouse embryonic stem cells by Rap1 interacting factor-1 (Rif1), a potential regulator of chromatin architecture in nuclei (2012)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa Sugata N、Kakusho N, Yamazaki S, Fukatsu R, and Masai H
  • 学会等名: 分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜(口頭発表およびポスター)
• [学会発表] The maintenance of undifferentiated state in mouse embryonic stem cells by Rap1 interacting factor-1 (Rif1), a potential regulator of chromatin architecture in nuclei (2012)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa, N., Kakusho, N., Yamazaki, S., Fukatsu, R. and Masai, H.
  • 学会等名: 日本分子生物学会
  • 発表場所: 神奈川県横浜市
• [学会発表] Regulation of replication program in fission yeast and human cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Hisao Masai, Satoshi Yamazaki, Yutaka Kanoh, Motoshi Hayano, Seiji Matsumoto, Naoko Yoshizawa, Rino Fukatsu, Naoko Kakusho, and Michie Shimmoto
  • 学会等名: 8th 3R meeting
  • 発表場所: 兵庫県淡路島
• [学会発表] Cell cycle regulation of mouse embryonic stem cells: E2F- and Emi1-mediated positive feedback regulation (2012)
  • 著者名/発表者名: Hisao Masai, Hiroko Fujii, Naoko Kakusho, Sayuri Ito, Satoshi Yamazaki, and Naoko Yoshizawa
  • 学会等名: 4th Southeast Stem Cell Consortium Workshop at Florida State University
  • 発表場所: アメリが合衆国、フロリダ州
• [学会発表] The maintenance of pluripotency in mouse embryonic stem cells by Rif1, a potential regulator of replication domains (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa Sugata N、Kakusho N, Yamazaki S, Fukatsu R, and Masai H
  • 学会等名: Joint CSH-Asia / ISSCR Conference on Cellular Programs & Reprogramming
  • 発表場所: 中国,蘇州(ポスター発表)
• [学会発表] The maintenance of pluripotency in mouse embryonic stem cells by Rif1, a potential regulator of replication domains (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa,N., Kakusho, N., Yamazaki, S., Fukatsu, R. and Masai, H.
  • 学会等名: Joint CSH-Asia / ISSCR Conference on Cellular Programs & Reprogramming
  • 発表場所: 中国・蘇州
• [学会発表] The maintenance of undifferentiated state in mouse embryonic stem cells by Rap1 interacting factor-1 (Rif1), a potential regulator of chromatin architecture in nuclei (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa,N., Kakusho, N., Yamazaki, S., Fukatsu, R. and Masai, H.
  • 学会等名: 日本分子生物学会
  • 発表場所: 横浜
• [図書] Methods in Molecular Biology (2014)
  • 著者名/発表者名: Yoshizawa-Sugata, N, and Masai.
  • 出版者: Cell cycle synchronization and flow cytometry analysis of mammalian cells
• [備考] ホームページ等
  • URL: http://www.igakuken.or.jp/genome/
• [備考] 公益財団法人東京都医学総合研究所 ゲノム動態プロジェクト
  • URL: http://www.igakuken.or.jp/genome/