次世代血友病治療法の開発と非ヒト霊長類を用いた前臨床研究

• 研究課題/領域番号: 23591426
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 三室 淳 自治医科大学, 医学部, 准教授 (10221607)
• 研究分担者: 窓岩 清治 自治医科大学, 医学部, 講師 (70296119) ; 大森 司 自治医科大学, 医学部, 講師 (70382843)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• 研究課題ステータス: 中途終了 (2011年度)
• 配分額: 5,330千円 (直接経費: 4,100千円、間接経費: 1,230千円); 2013年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円); 2012年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2011年度: 2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
• キーワード: 血友病 / 遺伝子治療 / アデノ随伴ウイルスベクター / カニクイザル / 血友病Ａクローンブタ / hemophilia / gene therapy

研究概要

血友病Ａ遺伝子治療：In vivoへのベクターの直接投与には染色体への組み込みがほとんどおこらないアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターを用い、ex vivoにて細胞への遺伝子導入し再移植する遺伝子細胞治療には染色体への組み込みが必要であるためSIVベクターを用いることとした。ヒトに近い種属の血友病モデル動物（血友病Ａクローンブタ）の作製に成功した。血友病Ａブタは出生後から出血傾向を示し、遺伝子治療効果判定に優れたモデル動物である。遺伝子細胞治療として、SIVベクターをもちいて間葉系幹細胞に導入し、血友病マウスへ移植し治療効果を確認出来た。血友病Ｂ遺伝子治療：マウスでの検討を終え、カニクイザルを用いた前臨床実験を遂行している。AAV8ベクターの遺伝子導入を阻害する中和抗体陽性サルでマイクロカテーテルを用いた門脈内ベクター投与を行い３頭のサルにおいて治療域に達する導入遺伝子由来FIX発現が得られ、抗AAV8抗体が存在していても遺伝子治療が可能であることが示された。血友病Ｂ遺伝子治療臨床研究に向けて作製したGMPグレードヒトFIX遺伝子搭載AAV8ベクター(GMP-AAV8hFIX）の純度および生物学的活性を検討したところ、SDS-PAGEにてGMP-AAV8hFIXの純度は極めて高く、電子顕微鏡による解析でもempty vectorの混入は低く抑えられていた。生物学的活性は血友病Ｂマウスを用いた検討では5x10の11乗/kgで平均58％の活性発現がえられマウス血漿中のFIX蛋白濃度とFIX活性は一致し、GMPグレードベクターの遺伝子導入活性が確認できた。

研究成果

• [雑誌論文] Tissue plasminogen activator (tPA) deficiency promotes early phase regeneration in the olfactory epithelium after bulbectomy (2013)
  • 著者名/発表者名: Makino N, Madoiwa S, Ohmori T, Katoh K, Ookawara S, Kanazawa T, Matsuo O, Ichikawa M, Mimuro J, Ichimura K, Sakata Y
  • 雑誌名: International Forum of Allergy & Rhinology 巻: 3 号: 6 ページ: 458-467
  • DOI: 10.1002/alr.21124
  • 査読あり
• [雑誌論文] Porcine model of hemophilia a. PLoS One. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kashiwakura Y
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 7(11) 号: 11 ページ: e49450-e49450
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0049450
  • 査読あり
• [雑誌論文] Morphological assessment of the luminal surface of olfactory epithelium in mice deficient in tissue plasminogen activator following bulbectomy. (2012)
  • 著者名/発表者名: Makino, N
  • 雑誌名: The Journal of Laryngology ＆ Otology. 巻: 126(11) 号: 11 ページ: 1114-1120
  • DOI: 10.1017/s002221511200206x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intra-articular injection of mesenchymal stem cells expressing coagulation factorameliorates hemophilic arthropathy in factor VIII-deficient mice. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kashiwakura, Y
  • 雑誌名: J Thromb Haemost. 巻: 10(9) 号: 9 ページ: 1802-1813
  • DOI: 10.1111/j.1538-7836.2012.04851.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] FTY720 improves functional recovery after spinal cord injury by primarily nonimmunomodulatory mechanisms (2012)
  • 著者名/発表者名: Norimatsu Y, Ohmori T, Kimura A, Madoiwa S, Mimuro J, Seichi A, Yatomi Y, Hoshino Y, Sakata Y.
  • 雑誌名: Am J Pathol 巻: 180(4) 号: 4 ページ: 1625-35
  • DOI: 10.1016/j.ajpath.2011.12.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lack of association between serum paraoxonase-1 activity and residual platelet aggregation during dual anti-platelet therapy (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohmori, T., et al.
  • 雑誌名: Thromb Res 巻: 129 号: 4 ページ: e36-e40
  • DOI: 10.1016/j.thromres.2011.10.033
  • 査読あり
• [雑誌論文] Immune response against serial infusion of factor VIII antigen through an implantable venous-access device system in haemophilia A mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Madoiwa, S., et al.
  • 雑誌名: Haemophilia 巻: 18 号: 3
  • DOI: 10.1111/j.1365-2516.2011.02686.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Local regulation of neutrophil elastase activity by endogenous alpha1-antitrypsin in lipopolysaccharide-primed hematological cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Dokai, M., Madoiwa, S., Yasumoto, A., Kashiwakura, Y., Ishiwata, A., Sakata, A., Makino, N., Ohmori, T., Mimuro, J., and Sakata, Y.
  • 雑誌名: Thromb Res 巻: 128 号: 3 ページ: 283-292
  • DOI: 10.1016/j.thromres.2011.04.024
  • 査読あり
• [雑誌論文] Integration-free and stable expression of FVIII using a human artificial chromosome (2011)
  • 著者名/発表者名: Kurosaki H, et.al.
  • 雑誌名: Journal of Human Genetics 巻: 56 号: 10 ページ: 727-733
  • DOI: 10.1038/jhg.2011.88
  • 査読あり
• [雑誌論文] Degradation of cross-linked fibrin by leukocyte elastase as alternative pathway for plasmin-mediated fibrinolysis in sepsis-induced disseminated intravascular coagulation. (2011)
  • 著者名/発表者名: Madoiwa, S. Tanaka, H. Nagahama, Y. Dokai, M. Kashiwakura, Y. Ishiwata, A. Sakata, A. Yasumoto, A. Ohmori, T. Mimuro, J. Sakata, Y.
  • 雑誌名: Thromb Res 巻: 127 号: 4 ページ: 349-355
  • DOI: 10.1016/j.thromres.2010.12.008
  • 査読あり
• [雑誌論文] Gene and cell therapy for hemophilia: recent advances (2011)
  • 著者名/発表者名: Mimuro, J., and Sakata, Y
  • 雑誌名: Rinsho Ketsueki 巻: 52 ページ: 361-367
  • NAID: 10029425166
  • 査読あり
• [雑誌論文] Predictive blood coagulation markers for early diagnosis of venous thromboembolism after total knee joint replacement (2011)
  • 著者名/発表者名: Watanabe, H. Madoiwa, S. Sekiya, H. Nagahama, Y. Matsuura, S. Kariya, Y. Ohmori, T. Mimuro, J. Hoshino, Y. Hayasaka, S. Sakata, Y.
  • 雑誌名: Thromb Res 巻: 128 号: 6 ページ: e137-e143
  • DOI: 10.1016/j.thromres.2011.07.030
  • 査読あり
• [学会発表] Post marketing surveillance of the safety and effectiveness of thrombomodulin alfa in Japanese patients with DIC (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoichi, Sakata., Hoyu,Takahashi., Hajime,Tsuji., Jun, Mimuro., Yutaka,Eguchi.,Isao,Kitajima.,Tadashi,Matsusits.,Tatsuhiko,Kuroda
  • 学会等名: ISTH2011.XXIII Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis.
  • 発表場所: Kyoto, Japan
• [学会発表] Leukocyte elastase as an alternative pathway for fibrinolysis. (2011)
  • 著者名/発表者名: Seiji, Madoiwa., Hideyuki, Tanaka., Yutaka, Nagahama., Atsushi, Yasumoto., Asuka, Sakata., Yuji, Kashiwakura., Tsukasa, Ohmori., Jun, Mimuro., Yoichi, Sakata.
  • 学会等名: 57th Annual SSC Meetin
  • 発表場所: Kyoto, Japan
• [学会発表] Intra-articular injection of autologous mesenchymal stem cells ameliorates hemophilic arthropathy in factor VIII-deficient mice. (2011)
  • 著者名/発表者名: Y. Kashiwakura., T.,Ohmori., J. Mimuro., A.,Yasumoto., Akira,Ishiwata., A.,Sakata., S.Madoiwa., M.Inoue., M.,Hasegawa., N.,Watanabe.,K.Tatsumi., K.Ohashi., T.Okano., Y.Sakata
  • 学会等名: ISTH2011.XXIII Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis.
  • 発表場所: Kyoto, Japan
• [学会発表] 人工多能性幹細胞を用いた新規血友病治療法に対する基礎的検討
  • 著者名/発表者名: 柏倉裕志
  • 学会等名: 第74回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] A role of plasminogen activator-plasmin system for the immune in murine hemophilia A
  • 著者名/発表者名: 窓岩清治
  • 学会等名: 第74回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] Dose-respnse relationship of factor IX expression in non-human orimates using AAV8-based vector
  • 著者名/発表者名: 水上浩明
  • 学会等名: 第74回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] Paxillin negatively regulates integrin signaling pathways in mouse platets
  • 著者名/発表者名: 坂田飛鳥
  • 学会等名: 第74回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] 敗血症性DICにおける血小板減少の予測因子としての凝固・線溶系マーカーの評価
  • 著者名/発表者名: 小山寛介
  • 学会等名: 第34回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] 第FVIII因子感作血友病Ａマウスにおけるマイクロボードを用いた連続的抗原投与モデルの構築
  • 著者名/発表者名: 窓岩清治
  • 学会等名: 第34回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] FVIII遺伝子導入MSCの関節内移植は血友病Ａマウスの血友病性関節症を改善する
  • 著者名/発表者名: 柏倉裕志
  • 学会等名: 第34回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] 血清パラオキソナーゼ活性は抗血小板薬投与下の凝集能と関連しない
  • 著者名/発表者名: 大森 司
  • 学会等名: 第34回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] 敗血症性DIC-下部消火器官穿孔における凝固障害の特徴
  • 著者名/発表者名: 小山寛介
  • 学会等名: 第34回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 東京