癌近傍リンパ節由来ヒトモノクローナル抗体ライブラリーの開発と機能解析

• 研究課題/領域番号: 23650607
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 腫瘍免疫学
• 研究機関: 富山大学
• 研究代表者: 磯部 正治 富山大学, 大学院・理工学研究部, 教授 (70211050)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円); 2012年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2011年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: ヒトモノクローナル抗体 / 免疫学 / 癌 / MAGrahd法 / がん細胞 / 腫瘍マーカー / 抗体療法

研究概要

癌の進行に伴い癌患者の血清中では、しばしば自己抗体が増加する。これらの抗体の中には、潜在的に癌の診断や治療用抗体の開発に役立つ抗体の存在が期待される。そこで本研究では、われわれが開発した、抗体産生単一細胞からの完全ヒトモノクローナル抗体迅速単離システムを用いて、癌患者由来の抗体産生細胞一個一個から抗体遺伝子を単離し培養細胞で発現させることによって得られた、多数の完全ヒトモノクローナル抗体をライブラリー化し、それぞれの抗体の結合特性や機能を調べることによって、癌細胞との結合能を示す抗体の単離を目指した。得られた癌患者由来のヒトモノクローナル抗体を、癌組織標本に対して免疫組織化学染色を行うことで、癌細胞との結合能を示す抗体のスクリーニングを行った。その結果、得られた抗体の中には、癌細胞に対して高い親和性を示すクローンが確かに存在することを見いだした。

研究成果

• [雑誌論文] Reduced Level of the BCL11B Protein Is Associated with Adult T-Cell Leukemia/Lymphoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Kurosawa, N., Fujimoto, R., Ozawa, T., Itoyama, T., Sadamori, N., and Isobe, M.
  • 雑誌名: PloS one 8
• [雑誌論文] Reduced Level of the BCL11B Protein Is Associated with Adult T-Cell Leukemia/Lymphoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Kurosawa, N.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8 号: 1 ページ: e55147-e55147
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0055147
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rapid production of antigen-specific monoclonal antibodies from a variety of animals (2012)
  • 著者名/発表者名: Kurosawa, N., Yoshioka, M., Fujimoto, R., Yamagishi, F., and Isobe, M.
  • 雑誌名: BMC biology 巻: 10 ページ: 80-80
• [雑誌論文] HELIOS-BCL11B fusion gene involvement in a t(2;14)(q34;q32) in an adult T-cell leukemia patient (2012)
  • 著者名/発表者名: Fujimoto, R., Ozawa, T., Itoyama, T., Sadamori, N., Kurosawa, N., and Isobe, M.
  • 雑誌名: Cancer genetics 巻: 205 ページ: 356-364
• [雑誌論文] HELIOS-BCL11B fusion gene involvement in a t(2;14)(q34;q32) in an adult T-cell leukemia patient (2012)
  • 著者名/発表者名: Fujimoto, R.
  • 雑誌名: Cancer Genet 巻: 205 号: 7-8 ページ: 356-364
  • DOI: 10.1016/j.cancergen.2012.04.006
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rapid production of antigen-specific monoclonal antibodies from a variety of animals (2012)
  • 著者名/発表者名: Kurosawa, N.
  • 雑誌名: BMC Biol 巻: 10 号: 1 ページ: 80-80
  • DOI: 10.1186/1741-7007-10-80
  • 査読あり
• [雑誌論文] Target-selective joint polymerase chain reaction: a robust and rapid method for high-throughput production of recombinant monoclonal antibodies from single cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshioka, M., Kurosawa, N., and Isobe, M.
  • 雑誌名: BMC biotechnology 巻: 11 ページ: 75-75
• [雑誌論文] Target-selective homologous recombination cloning for high-throughput generation of monoclonal antibodies from single plasma cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Kurosawa, N., Yoshioka, M., and Isobe, M.
  • 雑誌名: BMC biotechnology 巻: 11 ページ: 39-39
• [雑誌論文] Target-selective homologous recombination cloning for high-throughput generation of monoclonal antibodies from single plasma cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Nobuyuki Kurosawa, Megumi Yoshioka and Masaharu Isobe
  • 雑誌名: BMC Biotechnology 巻: 11 号: 1 ページ: 39-39
  • DOI: 10.1186/1472-6750-11-39
  • 査読あり
• [雑誌論文] Target-selective joint polymerase chain reaction: a robust and rapid method for high-throughput production of recombinant monoclonal antibodies from single cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Megumi Yoshioka, Nobuyuki Kurosawa and Masaharu Isobe
  • 雑誌名: BMC Biotechnology 巻: 11 号: 1 ページ: 75-75
  • DOI: 10.1186/1472-6750-11-75
  • 査読あり
• [学会発表] モルモット抗体可変領域遺伝子レパートリーの解析 (Analysis of immunoglobulin variable gene repertoire from the guinea pig.) (2012)
  • 著者名/発表者名: 吉岡 めぐみ, 成瀬 輝芳, 黒澤 信幸, 磯部 正治
  • 学会等名: 5回日本生化学会大会
  • 年月日: 2012-12-16
• [学会発表] 様々な動物からの迅速な抗原特異的モノクローナル抗体作製法の開発 (Rapid production of antigen-specific monoclonal antibodies from a variety of animals.) (2012)
  • 著者名/発表者名: 黒澤信幸, 吉岡 めぐみ, 藤本 理加, 磯部 正治
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 年月日: 2012-12-16
• [学会発表] Antigen-specific plasma/plasmablast cells identification from a variety of animals for the production of monoclonal antibodies. (2012)
  • 著者名/発表者名: Nobuyuki Kurosawa , Megumi Yoshioka, Rika Fujimoto and Masaharu Isobe
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
  • 年月日: 2012-12-03
• [学会発表] BCLL11B蛋白質発現減少は成人T細胞白血病の発症に関与する (2012)
  • 著者名/発表者名: 黒澤 信幸, 藤本 理加, 磯部 正治
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術総会
  • 年月日: 2012-09-19
• [学会発表] Semi-Automatic Cloning and Expression of Immunoglobulin Genes from Single-Plasma Cells for High-Throughput Generation of Monoclonal Antibodies (2012)
  • 著者名/発表者名: Masaharu Isobe
  • 学会等名: PEP TALK The Protein Science Week PIPELINE4
  • 発表場所: San Diego, CA USA
  • 年月日: 2012-01-09
• [学会発表] Semi-Automatic Cloning and Expression of Immunoglobulin Genes from Single- Plasma Cells for High-Throughput Generation of Monoclonal Antibodies. (2012)
  • 著者名/発表者名: Masaharu Isobe
  • 学会等名: PEP TALK The Protein Science Week PIPELINE4(招待講演)
  • 発表場所: San Diego, CA USA
• [学会発表] TS-jPCR 法を用いた単一細胞からのハイスループットな組換えモノクローナル抗体作製法の開発 (Target Selective-joint Polymerase Chain Reaction for High-throughput Generation of Recombinant Monoclonal Antibodies from Single Cells) (2011)
  • 著者名/発表者名: San Diego, CA USA
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 年月日: 2011-12-12
• [学会発表] Magnetic-beads Reaction through Arrayed Hanging-Drops (MAGrahd) for high-throughput amplification of immunoglobulin genes from single B cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Nobuyuki Kurosawa, Megumi Yoshioka and Masaharu Isobe
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
  • 年月日: 2011-12-04
• [学会発表] Target-selective homologous recombination cloning (TS-HR) for high-throughput generation of monoclonal antibodies from single plasma cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Rika Fujimoto, Megumi Yoshioka, Nobuyuki Kurosawa and Masaharu Isobe
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
  • 年月日: 2011-12-04
• [学会発表] Target-selective joint polymerase chain reaction (TS-jPCR): A robust and rapid method for high-throughput production of recombinant monoclonal antibodies from single cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Megumi Yoshioka, Nobuyuki Kurosawa and Masaharu Isobe
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
  • 年月日: 2011-12-04
• [学会発表] A robust and rapid system for high-throughput generation of recombinant monoclonal antibodies from a variety of species. (2011)
  • 著者名/発表者名: Masaharu Isobe, Megumi Yoshioka, Rika Fujimoto and Nobuyuki Kurosawa
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
  • 年月日: 2011-12-03
• [学会発表] 単一細胞からのハイスループットな抗体遺伝子/T細胞受容体遺伝子のクローニング及び発現システムの開発(High throughput cloning and expression of immunoglobulin genes/T-cell receptor genes from single cells.) (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉岡 めぐみ, 黒澤 信幸, 磯部 正治
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 年月日: 2011-09-23
• [学会発表] 単一細胞からのハイスループットな抗体遺伝子/Ｔ細胞受容体遺伝子のクローニング及び発現システムの開発(High throughput cloning and expression of immunoglobulin genes/T-cell receptor genes from single cells.) (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉岡 めぐみ,黒澤 信幸,磯部 正治
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
• [学会発表] Magnetic-beads Reaction through Arrayed Hanging-Drops (MAGrahd) for high-throughput amplification of immunoglobulin genes from single B cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Nobuyuki Kurosawa, Megumi Yoshioka and Masaharu Isobe
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
• [学会発表] Target-selective homologous recombination cloning (TS-HR) for high- throughput generation of monoclonal antibodies from single plasma cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Rika Fujimoto, Megumi Yoshioka, Nobuyuki Kurosawa and Masaharu Isobe
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
• [学会発表] Target-selective joint polymerase chain reaction (TS-jPCR): A robust and rapid method for high-throughput production of recombinant monoclonal antibodies from single cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Megumi Yoshioka, Nobuyuki Kurosawa and Masaharu Isobe
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
• [学会発表] TS-jPCR法を用いた単一細胞からのハイスループットな組換えモノクローナル抗体作製法の開発(Target Selective-joint Polymerase Chain Reaction for High-throughput Generation of Recombinant Monoclonal Antibodies from Single Cells) (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉岡 めぐみ,黒澤 信幸,磯部 正治
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
• [学会発表] BCLL11B蛋白質発現減少は成人T細胞白血病の発症に関与する
  • 著者名/発表者名: 黒澤 信幸
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: ホテルロイトン札幌
• [学会発表] A robust and rapid system for high-throughput generation of recombinant monoclonal antibodies from a variety of species.
  • 著者名/発表者名: Masaharu Isobe
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
• [学会発表] Antigen-specific plasma/plasmablast cells identification from a variety of animals for the production of monoclonal antibodies.
  • 著者名/発表者名: Nobuyuki Kurosawa
  • 学会等名: Antibody Engineering
  • 発表場所: San Diego, CA USA
• [学会発表] モルモット抗体可変領域遺伝子レパートリーの解析 (Analysis of immunoglobulin variable gene repertoire from the guinea pig.)
  • 著者名/発表者名: 吉岡 めぐみ
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
• [学会発表] 様々な動物からの迅速な抗原特異的モノクローナル抗体作製法の開発 (Rapid production of antigen-specific monoclonal antibodies from a variety of animals.)
  • 著者名/発表者名: 黒澤 信幸
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
• [産業財産権] 反応治具及び反応方法、並びにcDNA合成方法 (2013)
  • 発明者名: 磯部正治、黒澤信幸
  • 権利者名: 立大学法人富山大学
  • 取得年月日: 2013-04-12
• [産業財産権] 形質細胞または形質芽細胞の選択方法,目的抗原特異的な抗体の製造方法,新規モノクローナル抗体 (2012)
  • 発明者名: 黒澤信幸、磯部正治
  • 権利者名: 国立大学法人富山大学
  • 出願年月日: 2012-03-28
  • 外国
• [産業財産権] 形質細胞または形質芽細胞の選択方法，目的抗原特異的な抗体の製造方法，新規モノクローナル抗体 (2012)
  • 発明者名: 黒澤信幸、磯部正治
  • 権利者名: 国立大学法人富山大学
  • 出願年月日: 2012
  • 外国