機能的セルトリ細胞の長期培養系の確立

• 研究課題/領域番号: 23659095
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 解剖学一般(含組織学・発生学)
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 篠原 隆司 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30322770)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2013年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2012年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2011年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
• キーワード: 精子形成 / セルトリ細胞 / 精子幹細胞 / 増殖 / T antigen

研究概要

これまでセルトリ細胞を長期にわたり、その機能を維持しながら培養する方法は確立されていなかった。我々は精子幹細胞のニッシェ機能を保持したセルトリ細胞の培養を確立した。この培養では、EGF, FGF2の存在下でセルトリ細胞と精子幹細胞を共培養すると、後者がセルトリ細胞の下に潜り込み、敷石状のコロニーを形成し、5ヶ月以上に渡り試験管内で維持される。こうして維持された細胞は精巣に移植すると、正常な精子を作った。また、この敷石状のコロニー形成はCXCR4もしくはRETの抑制により減少したことから、これらの分子が精子幹細胞のニッシェへの移動に関与することが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Cell-cycle-dependent colonization of mouse spermatogonial stem cells after transplantation into seminiferous tubules (2014)
  • 著者名/発表者名: Ishii K., Kanatsu-Shinohara M., Shinohara T
  • 雑誌名: J. Reprod. Dev 巻: 60(1) ページ: 37-46
  • NAID: 130003381858
• [雑誌論文] Cell-cycle-dependent Colonization of Mouse Spermatogonial Stem Cells After Transplantation into Seminiferous Tubules. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ishii K, Kanatsu-Shinohara M, Shinohara T.
  • 雑誌名: J Reprod Dev. 巻: 60 ページ: 37-46
  • NAID: 130003381858
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cell-cycle-dependent Colonization of Mouse Spermatogonial Stem Cells After Transplantation into Seminiferous Tubules. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M, Mori Y, Shinohara T.
  • 雑誌名: J Reprod Dev 巻: 89 ページ: 140-140
  • DOI: 10.1095/biolreprod.113.114629
  • NAID: 130003381858
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Enrichment of mouse spermatogonial stem cells based on aldehyde dehydrogenase activity (2013)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shionohara M., Mori Y., Shinohara T
  • 雑誌名: Biol. Reprod 巻: 89(6) ページ: 140-140
• [雑誌論文] Spermatogonial stem cell self-renewal and development (2013)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Shinohara T
  • 雑誌名: Annu. Rev. of Cell and Developmental Biology 巻: 29 ページ: 163-187
• [雑誌論文] Regulation of pluripotency in male germline stem cells by Dmrt1 (2013)
  • 著者名/発表者名: Takashima S., Hirose M., Ogonuki N., Ebisuya M., Inoue K., Kanatsu-Shinohara M., Tanaka T., Nishida E., Ogura A., Shinohara T
  • 雑誌名: Genes Dev 巻: 27(18) ページ: 1949-1958
• [雑誌論文] ROS are required for spermatogonial stem cell self-renewal (2013)
  • 著者名/発表者名: Morimoto H., Iwata K., Ogonuki N., Inoue K., Ogura A., Kanatsu-Shinohara M., Morimoto T., Yabe-Nishimura C., Shinohara T
  • 雑誌名: Cell Stem Cell 巻: 12(6) ページ: 774-786
• [雑誌論文] Spermatogonial stem cell self-renewal and development. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M, Shinohara T.
  • 雑誌名: Annu Rev Cell Dev Biol 巻: 29 ページ: 163-187
  • DOI: 10.1146/annurev-cellbio-101512-122353
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Regulation of pluripotency in male germline stem cells by Dmrt1. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takashima S, Hirose M, Ogonuki N, Ebisuya M, Inoue K, Kanatsu-Shinohara M, Tanaka T, Nishida E, Ogura A, Shinohara T.
  • 雑誌名: Genes & Development 巻: 27 ページ: 1949-1958
  • DOI: 10.1101/gad.220194.113
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] ROS are required for mouse spermatogonial stem cell self-renewal. (2013)
  • 著者名/発表者名: Morimoto H, Iwata K, Ogonuki N, Inoue K, Atsuo O, Kanatsu-Shinohara M, Morimoto T, Yabe-Nishimura C, Shinohara T.
  • 雑誌名: Cell Stem Cell 巻: 12 ページ: 774-86
  • DOI: 10.1016/j.stem.2013.04.001
  • NAID: 120005285490
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Enrichment of mouse spermatogaonial stem cells by melanoma cell adhesion molecule expression (2012)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Morimoto H., Shinohara T
  • 雑誌名: Biol. Reprod 巻: 87(6) ページ: 139-139
• [雑誌論文] Reconstitution of mouse spermatogonial stem cell niches in culture (2012)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Inoue K., Takashima S., Takehashi M., Ogonuki N., Morimoto H., Nagasawa T., Ogura A., Shinohara T
  • 雑誌名: Cell Stem Cell 巻: 11 ページ: 567-578
• [雑誌論文] FGF2 mediates mouse spermatogonial stem cell self-renewal via upregulation of Etv5 and Bcl6b through MAPK2K1 activation (2012)
  • 著者名/発表者名: Ishii K., Kanatsu-Shinohara M., Toyokuni S., Shinohara T
  • 雑誌名: Development 巻: 139(10) ページ: 1734-1743
• [雑誌論文] Hybridization of testis-derived stem cells with somatic cells and embryonic stem cells in mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Takehashi M., Tada M., Kanatsu-Shinohara M., Morimoto H., Kazuki Y., Oshimura M., Tada T., Shinohara T
  • 雑誌名: Biol. Reprod 巻: 86(6) ページ: 178-178
• [雑誌論文] In vitro transformation of mouse testis cells by oncogene transfection (2012)
  • 著者名/発表者名: Morimoto H., Lee J., Tanaka T., Ishii K., Toyokuni S., Kanatsu-Shinohara M., Shinohara T
  • 雑誌名: Biol. Reprod 巻: 86(5)
• [雑誌論文] “Reconstitution of mouse spermatogonial stem cell niches in culture” (2012)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara, M., Inoue, K., Takashima, S.,Takehashi, M.,Ogonuki, N., Morimoto, H., Nagasawa, T., Ogura, A. and Shinohara, T
  • 雑誌名: Cell Stem Cell 巻: 11(4) ページ: 567-578
  • DOI: 10.1016/j.stem.2012.06.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vitro transformation of mouse testis cells by oncogene transfection (2012)
  • 著者名/発表者名: Morimoto, H., Lee, J., Tanaka, T., Ishii, K., Toyokuni, S., Kanatsu-Shinohara, M., Shinohara, T.
  • 雑誌名: Biology of Reproduction 巻: 86
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rac mediates mouse spermatogonial stem cell homing to germline nishes by regulating transmigration through the blood-testis barrier (2011)
  • 著者名/発表者名: Takashima S., Kanatsu-Shinohara M., Tanaka T., Takehashi M., Morimoto H., Shinohara T
  • 雑誌名: Cell Stem Cell 巻: 9(5) ページ: 463-475
• [雑誌論文] Dynamic changes in EPCAM expression during spermatogonial stem cell differentiation in the mouse testis (2011)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Takashima S., Ishii K., Shinohara T
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 6(8)
  • NAID: 120003405532
• [雑誌論文] Homologous recombination in rat germline stem cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Kato-Itoh M., Ikawa M., Takehashi M., Sanbo M., Morioka Y., Tanaka T., Morimoto H., Hirabayashi M., Shinohara T
  • 雑誌名: Biol. Reprod 巻: 85(1) ページ: 208-217
• [雑誌論文] Unstable side population phenotype of mouse spermatogonial stem cells in vitro (2011)
  • 著者名/発表者名: Shinohara T., Ishii K., Kanatsu-Shinohara M
  • 雑誌名: J. Reprod. Dev 巻: 57(2) ページ: 288-295
  • NAID: 10028275625
• [雑誌論文] Dynamic changes in EPCAM expression during spermatogonial stem cell differentiation in the mouse testis (2011)
  • 著者名/発表者名: Kanatsu-Shinohara M., Takashima S., Shinohara T.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 6
  • NAID: 120003405532
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rac mediates spermatogonial stem cell homing to germline niches by regulating transmigration through the blood-testis barrier (2011)
  • 著者名/発表者名: Takashima, S., Kanatsu-Shinohara,M. Tanaka,T., Takehashi, M.,Morimoto, H.,Shinohara, T.
  • 雑誌名: Cell Stem Cell 巻: 9 ページ: 463-475
  • 査読あり
• [学会発表] Derivation of stem cell lines from the male germline (2012)
  • 著者名/発表者名: Takashi Shinohara
  • 学会等名: International Workshop: Radiation Effects on Mutation in Somatic and Germline Stem Cell(招待講演)
  • 発表場所: 放影研（広島県）
• [学会発表]
  • 学会等名: Brinster symposium
• [備考] 新聞での報道 2011年11月5日 京都新聞朝刊 27面京大グループ 精子幹細胞の増殖に働くタンパク質特定 移植治療への応用に期待
• [備考] 新聞での報道 2012年10月5日 京都新聞朝刊 24面精子幹細胞 増殖環境を再現-京大など, 試験管内に 移植治療に応用期待
• [備考] 新聞での報道 2012年10月5日 産經新聞朝刊 23面精巣内定着率向上 タンパク質特定 京大グループ