ナノ磁性微粒子と新規FLAG抗体を用いた新規GPCR結合因子の同定

• 研究課題/領域番号: 23659157
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 医化学一般
• 研究機関: 順天堂大学 (2012); 九州大学 (2011)
• 研究代表者: 横溝 岳彦 順天堂大学, 医学部, 教授 (60302840)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2012年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2011年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
• キーワード: GPCR / 免疫沈降 / 結合タンパク質

研究概要

高感度・低バックグラウンドの高親和性抗 FLAG 抗体 2H8 の樹立を行い、本抗体と磁気ビーズを組み合わせた新規 G タンパク質共役型受容体(GPCR)免疫沈降法を開発した。 本法を用いることで、これまで免疫沈降が困難であった GPCR の免疫沈降が可能になっのみならず、これまで不可能であった GPCR タンパク質の可視化にも成功した。本法を用いることで、新規 GPCR 結合タンパク質候補を複数同定した。

研究成果

• [雑誌論文] A high-affinity monoclonal antibody against the FLAG tag useful for G-protein coupled receptor study (2012)
  • 著者名/発表者名: Sasaki F, Okuno T, Saeki K, Liu Min, Onohara N, Kato H, Shimizu T, Yokomizo T
  • 雑誌名: Anal. Biochem 巻: 425 ページ: 157-165
• [雑誌論文] Helix 8 of leukotriene B4 receptor 1 inhibits ligand-induced internalization (2012)
  • 著者名/発表者名: Aratake Y, Okuno T, Matsunobu T, Saeki K, Takayanagi R, Furuya S, Yokomizo T
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 26 ページ: 4068-4078
• [雑誌論文] クローズアップ実験法:新規抗 FLAG 抗体 2H8 の活用法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐々木文之、横溝岳彦
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 30 ページ: 2987-2992
• [雑誌論文] A high-affinity monoclonal antibody against the FLAG tag useful for G-protein coupled receptor study (2012)
  • 著者名/発表者名: F.Sasaki
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: (掲載決定) 号: 2 ページ: 157-165
  • DOI: 10.1016/j.ab.2012.03.014
  • 査読あり
• [雑誌論文] クローズアップ実験法：新規抗FLAG抗体2H8の活用法 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐々木文之、横溝岳彦
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 30 ページ: 2987-2992
• [雑誌論文] Leukotriene B_4 receptors : Novel roles in immunological regulations (2011)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo T
  • 雑誌名: Adv.Enzyme Regul. 巻: 51 号: 1 ページ: 59-64
  • DOI: 10.1016/j.advenzreg.2010.08.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] What is the natural ligand of GPR55? (2011)
  • 著者名/発表者名: Okuno T, Yokomizo T
  • 雑誌名: J.Biochem.(Tokyo) 巻: 149 号: 5 ページ: 495-497
  • DOI: 10.1093/jb/mvr022
  • NAID: 10030584968
  • 査読あり
• [学会発表] A high-affinity monoclonal antibody against the FLAG tag useful for G-protein coupled receptor study (2013)
  • 著者名/発表者名: F. Sasaki,, T. Yokomizo
  • 学会等名: 5th Annual International Congress of Antibodies
  • 発表場所: 中国、杭州
• [学会発表] Generation of a high-affinity anti-FLAG monoclonal antibody 2H8 (2013)
  • 著者名/発表者名: T. Yokomizo
  • 学会等名: 5th Annual International Congress of Antibodies
  • 発表場所: 中国、杭州
  • 招待講演
• [学会発表] Expression and Function of a Leukotriene B4 receptor 1 in M2-type macrophage (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐々木文之, 古賀友紹, 佐伯和子, 奥野利明, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第41回日本免疫学会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Generation of a novel anti-FLAG monoclonal antibody. (2012)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo, T
  • 学会等名: The 7th Korea-Japan Conference on Cellular Signaling for Young Scientists(招待講演)
  • 発表場所: Ulsan(韓国)
• [学会発表] Two distinct leukotriene B4 receptors: BLT1 and BLT2. (2011)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo, T, Liu, M, Saeki, K, Okuno, T
  • 学会等名: The 10th JBS Biofrontier Symposium : New aspects of phospholipid biology and medicine(招待講演)
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] 生理活性脂質受容体の同定と生体内機能の解析・高親和性FLAG抗体の樹立と応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦
  • 学会等名: 第2回九州エリア薬理・生理学若手研究会(招待講演)
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] Improved immunoprecipitation method for epitope-tagged GPCRs. (2011)
  • 著者名/発表者名: Morisaki Y., Sasaki F., Aratake Y., Okuno T., Saeki K., Yokomizo T.
  • 学会等名: The 10th JBS Biofrontier Symposium : New aspects of phospholipid biology and medicine
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] Improved immunoprecipitation method for epitope-tagged GPCRs. (2011)
  • 著者名/発表者名: 森崎雄一, 佐々木文之, 荒武良総, 奥野利明, 佐伯和子, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
• [図書] 「最新生理活性脂質研究-実験手法、基礎的知識とその応用-」遺伝子医学MOOK 24号 (2013)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦
  • 総ページ数: 360
  • 出版者: メディカル ドゥ社
• [図書] 生化学実践問題 基礎と臨床をつなぐ420題 (2011)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦
  • 総ページ数: 214
  • 出版者: 南江堂
• [備考] 新規 FLAG 抗体 2H8 の紹介
  • URL: http://plaza.umin.ac.jp/j_bio/Biochem1/2H8_Ab.html
• [備考] High affinity FLAG Ab 2H8-高親和性FLAG抗体2H8
  • URL: http://plaza.umin.ac.jp/j_bio/Biochem1/2H8_Ab.html
• [備考] 順天堂大学医学部第一生化学
  • URL: http://plaza.umin.ac.jp/j_bio/