独自のin vivo部位特異的遺伝子導入法による、コンディショナル発現系の開発

• 研究課題/領域番号: 23700514
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 実験動物学
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 大塚 正人 東海大学, 医学部, 講師 (90372945)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2012年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円); 2011年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: トランスジェニックマウス / 顕微注入法 / Cre-loxP / PITT / コンディショナル発現 / コンディショナル / 部位特異的遺伝子挿入 / 顕微注入

研究概要

本研究計画では、申請者が開発したターゲットトランスジェニック(Tg)マウス作製法(PITT法)の有用性、汎用性の向上を目指し、1)組織特異的プロモーターの使用と有用性の証明、2)Dre-rox組換え系への応用、3)floxedコンストラクトを挿入可能とする新たな種マウス作製、4)誘導遺伝子発現系の構築、を実行し、技術的可能性を評価すると同時に、学術的研究に有用なマウスリソースの開発を行った。

研究成果

• [雑誌論文] Improvement of pronuclear injection-based targeted transgenesis (PITT) by iCre mRNA-mediated site-specific recombination (2013)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Hayashi H, Nakaoka H, Kimura M, Sato M, Gurumurthy CB, Inoko H
  • 雑誌名: Transgenic Research 巻: 22 号: 4 ページ: 873-875
  • DOI: 10.1007/s11248-013-9703-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] PiggyBac-mediated generation of stable transfectants with surface HLA expression from a small number of cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Miura H., Inoko H., Inoue I., Okada Y., Tanaka M., Sato M. and Ohtsuka M.
  • 雑誌名: Anal. Biochem 巻: 437 号: 1 ページ: 29-31
  • DOI: 10.1016/j.ab.2013.02.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted Toxin-Based Selectable Drug-Free Enrichment of Mammalian Cells with High Transgene Expression (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Biology 巻: 2 号: 1 ページ: 341-355
  • DOI: 10.3390/biology2010341
  • 査読あり
• [雑誌論文] cells consist of two cell types, as evidenced by cytochemical staining for alkaline phosphatase activity: A possible model for cancer stem cell study (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M., Kubota N, Inada E, Saitoh I., Ohtsuka M., Nakamura S., Sakurai T., Watanabe S. HeLa
  • 雑誌名: Advances in Stem Cells ページ: 208514-208514
  • 査読あり
• [雑誌論文] Functional Recovery of a Whole Ovary Transplanted Into Syngenic Testis in Mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S, Yasuoka Y
  • 雑誌名: Clon Transgen 巻: 1 号: 01 ページ: 102-102
  • DOI: 10.4172/2168-9849.1000102
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fluorescent transgenic mice suitable for multi-color aggregation chimera studies (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Gurumurthy CB, Kimura M, Inoko H, Yoshimura S, Sato M
  • 雑誌名: Cell and Tissue Research 巻: 350 号: 2 ページ: 251-260
  • DOI: 10.1007/s00441-012-1470-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a technique for efficient gene transfer to antral follicular cells in the mouse ovary (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Watanabe S
  • 雑誌名: Systems Biology in Reproductive Medicine 巻: 58 号: 3 ページ: 136-141
  • DOI: 10.3109/19396368.2012.656796
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determination of the Optimal Concentration of Several Selective Drugs Useful for Generating Multi-Transgenic Porcine Embryonic Fibroblasts (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Ohtsuka M, Miura H, Miyoshi K, Watanabe S.
  • 雑誌名: Reproduction in Domestic Animals/John Wiley & Sons, Inc. 巻: 47 号: 5 ページ: 759-765
  • DOI: 10.1111/j.1439-0531.2011.01964.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo gene transfer in mouse preimplantation embryos after intraoviductal injection of plasmid DNA and subsequent in vivo electroporation (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M
  • 雑誌名: Syst Biol Reprod Med 巻: 58 号: 5 ページ: 278-287
  • DOI: 10.3109/19396368.2012.688088
  • 査読あり
• [雑誌論文] A simplified protocol for the semi-large scale recovery of plasmids from Escherichia coli grown on agar plates (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: J Biomed Sci Eng. 巻: 5 号: 07 ページ: 406-408
  • DOI: 10.4236/jbise.2012.57051
  • 査読あり
• [雑誌論文] PITT: Pronuclear Injection-Based Targeted Transgenesis, a Reliable Transgene Expression Method in Mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Sato M, Kimura M, Inoko H, Gurumurthy CB
  • 雑誌名: Experimental Animals 巻: 61 号: 5 ページ: 489-502
  • DOI: 10.1538/expanim.61.489
  • NAID: 10031121853
  • ISSN: 0007-5124, 1341-1357, 1881-7122
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of miRNA-based knockdown mice showing reproducible knockdown of the gene of interest (2012)
  • 著者名/発表者名: Miura H., Inoko H., Kimura M. and Ohtsuka M.
  • 雑誌名: J. Reprod. Develop. 巻: 58
  • NAID: 130007024276
• [雑誌論文] Loss of glial fibrillary acidic protein marginally accelerates disease progression in a SOD1(H46R) transgenic mouse model of ALS (2011)
  • 著者名/発表者名: Yasuhiro Yoshii
  • 雑誌名: Neuroscience Research 巻: 30巻 号: 3 ページ: 321-329
  • DOI: 10.1016/j.neures.2011.03.006
  • 査読あり
• [雑誌論文] Simple cloning strategy using GFPuv gene as positive/negative indicator (2011)
  • 著者名/発表者名: Miura Hiromi; Inoko Hidetoshi; Inoue Ituro, et al
  • 雑誌名: ANALYTICAL BIOCHEMISTRY 巻: 416:2 号: 2 ページ: 237-239
  • DOI: 10.1016/j.ab.2011.04.040
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted transgenesis through pronuclear injection of improved vectors into in vitro fertilized eggs (2011)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka, M., Miura, H., Nakaoka, H., Kimura, M., Sato, M., Inoko, H.
  • 雑誌名: Transgenic Research 巻: 21:1 号: 1 ページ: 225-226
  • DOI: 10.1007/s11248-011-9505-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] PITT法――マウス受精卵での部位特異的遺伝子導入法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 29 ページ: 2687-2692
• [学会発表] Development and recent progress in pronuclear injection-based mouse targeted transgenesis method by site-specific recombination (2013)
  • 著者名/発表者名: Masato Ohtsuka
  • 学会等名: Genetic Transformation Technologies (plants and animals)
  • 発表場所: Vienna, Austria
  • 招待講演
• [学会発表] PITT法を利用して作製したノックダウンマウスにおけるノックダウン効果の比較解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、佐藤正宏、大塚正人
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] iCre mRNA注入による次世代型トランスジェニックマウス作製法(PITT)の効率改善 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、佐藤正宏、三浦浩美
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] マウス成熟卵胞細胞への生体内遺伝子導入法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、赤坂恵理、斉藤一誠、大塚正人、渡部聡
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] 受精卵への顕微注入法を介したターゲットトランスジェニックマウス作製 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人
  • 学会等名: 第14回REG部会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] 腎近位尿細管Kチャネル(TASK2)の酸塩基調節における役割 (2012)
  • 著者名/発表者名: 安岡有紀子、大塚正人、佐藤雄一、木村穣、河原克雅
  • 学会等名: 第42回日本腎臓学会東部学術大会
  • 発表場所: 新潟
• [学会発表] プラスミドDNAの卵管内注入、続く電気穿孔によるマウス着床前胚への遺伝子導入法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、赤坂恵理、斉藤一誠、大塚正人、渡部聡
  • 学会等名: 第59回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 別府
• [学会発表] Recombinase及びIntegraseによる部位特異的遺伝子導入効率の比較検討 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 第59回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 別府
• [学会発表] 間葉系幹細胞の経鼻脳内ホーミングの解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 城戸直人、高橋沙世、菊池光太、鈴木綾、大久保直登、鄒 鶤、田邉千晶、劉俊俊、劉株余、前田智司、大塚正人、藤村朗、佐原資謹、石崎明、駒野宏人
  • 学会等名: 第78回日本生化学会東北支部例会
  • 発表場所: 山形
• [学会発表] Recombinase及びIntegraseによる部位特異的遺伝子導入効率の比較検討 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 第59回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: B-Con Plaza：ビーコンプラザ（別府）
• [学会発表] プラスミドDNAの卵管内注入、続く電気穿孔によるマウス着床前胚への遺伝子導入法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、赤坂恵理、斉藤一誠、大塚正人、渡部聡
  • 学会等名: 第59回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: B-Con Plaza：ビーコンプラザ（別府）
• [学会発表] 腎近位尿細管Kチャネル（TASK2）の酸塩基調節における役割 (2012)
  • 著者名/発表者名: 安岡有紀子、大塚正人、佐藤雄一、木村穣、河原克雅
  • 学会等名: 第４２回日本腎臓学会東部学術大会
  • 発表場所: 朱鷺メッセ：新潟コンベンションセンター
• [学会発表] 受精卵への顕微注入法を介したターゲットトランスジェニックマウス作製 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人
  • 学会等名: 第14回REG部会
  • 発表場所: 順天堂大学医学部
• [学会発表] マウス成熟卵胞細胞への生体内遺伝子導入法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、赤坂恵理、斉藤一誠、大塚正人、渡部聡
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
• [学会発表] iCre mRNA注入による次世代型トランスジェニックマウス作製法（PITT）の効率改善 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、佐藤正宏、三浦浩美
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
• [学会発表] PITT法を利用して作製したノックダウンマウスにおけるノックダウン効果の比較解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、佐藤正宏、大塚正人
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
• [学会発表] 選択用薬剤を使わない簡便な遺伝子高発現細胞株の取得方法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、大塚正人、中村伸吾、櫻井敬之、渡部聡
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] GFPuv遺伝子とTypeIIS制限酵素を用いた遺伝子発現ベクターの簡便な構築法とその応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、佐藤正宏、猪子英俊、大塚正人
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] 遺伝子トランスジェニックALSマウスモデルにおいてグリア線維性酸性蛋白の欠損は疾患進行に若干の影響を与える (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉井康裕、大友麻子、潘雷、大塚正人、岩崎泰雄、秦野伸二
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] 赤色蛍光強発現Tgマウスの歯科領域研究における有用性 (2011)
  • 著者名/発表者名: 桑島幸紀、古川真司、安藤禎紀、佐原資謹、石崎明、大塚正人、藤村朗、清野幸男、三浦廣行
  • 学会等名: 第53回歯科基礎医学会学術大会・総会
  • 発表場所: 岐阜
• [学会発表] Vibratory Microinjection System Facilitates Injection of BAC Transgene Mouse Molecular Genetics (2011)
  • 著者名/発表者名: Dilidaer Kudereti, Fujio Miyawaki, Hiroki Haremaki, Tomohiro Yoshizawa, Masato Ohtsuka, Jun Hasegawa
  • 学会等名: Wellcome Trust Genome Campus
  • 発表場所: Hinxton, Cambridge, UK.
• [学会発表] SOD1H46R遺伝子トランスジェニックALSマウスモデルにおいてグリア線維性酸性蛋白の欠損は疾患をわずかに進行させる (2011)
  • 著者名/発表者名: 秦野伸二、吉井康裕、大友麻子、潘雷、大塚正人、岩崎泰雄
  • 学会等名: 第54回日本神経化学会大会
  • 発表場所: 石川
• [学会発表] 再現性良いノックダウン効率を示す、miRNA 発現トランスジェニックマウス作製法の確立 (2011)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、猪子英俊、木村穣、大塚正人
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 盛岡
• [学会発表] 受精卵への顕微注入法を介した、部位特異的トランスジェニックマウス作製法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 盛岡
• [学会発表] SOD1H46R遺伝子組み換えALSマウスモデルにおいてグリア線維性産生蛋白の欠損は疾患をわずかに進行させる (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉井康裕、大友麻子、Pan L.、大塚正人、川邊清一、池田憲、岩崎泰雄、池田穣衛、秦野伸二
  • 学会等名: 第52回日本神経学会学術大会
  • 発表場所: 名古屋
• [学会発表] 受精卵への顕微注入法を介した、部位特異的トランスジェニックマウス作製法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 58回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] 受精卵への顕微注入法を介した、部位特異的トランスジェニックマウス作製法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、木村穣、猪子英俊
  • 学会等名: 第58回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: タワーホール船堀
• [学会発表] SOD1H46R遺伝子組み換えALSマウスモデルにおいてグリア線維性産生蛋白の欠損は疾患をわずかに進行させる (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉井康裕、大友麻子、Pan L.、大塚正人、川邊清一、池田憲、岩崎泰雄、池田穣衛、秦野伸二
  • 学会等名: 第52回日本神経学会学術大会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場
• [学会発表] 再現性良いノックダウン効率を示す、miRNA 発現トランスジェニックマウス作製法の確立 (2011)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、猪子英俊、木村穣、大塚正人
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: いわて県民情報交流センター・アイーナ
• [学会発表] SOD1H46R遺伝子トランスジェニックALSマウスモデルにおいてグリア線維性酸性蛋白の欠損は疾患をわずかに進行させる (2011)
  • 著者名/発表者名: 秦野伸二、吉井康裕、大友麻子、潘雷、大塚正人、岩崎泰雄
  • 学会等名: 第54回日本神経化学会大会
  • 発表場所: 石川県山代温泉 瑠璃光
• [学会発表] Vibratory Microinjection System Facilitates Injection of BAC Transgene (2011)
  • 著者名/発表者名: Dilidaer Kudereti, Fujio Miyawaki, Hiroki Haremaki, Tomohiro Yoshizawa, Masato Ohtsuka, Jun Hasegawa
  • 学会等名: Mouse Molecular Genetics
  • 発表場所: Wellcome Trust Genome Campus, Hinxton, Cambridge, UK.
• [学会発表] 赤色蛍光強発現Tgマウスの歯科領域研究における有用性 (2011)
  • 著者名/発表者名: 桑島幸紀、古川真司、安藤禎紀、佐原資謹、石崎明、大塚正人、藤村朗、清野幸男、三浦廣行
  • 学会等名: 第53回歯科基礎医学会学術大会・総会
  • 発表場所: 長良川国際会議場
• [学会発表] Pronuclear Injection-Based Mouse Targeted Transgenesis by Site-Specific Recombination (2011)
  • 著者名/発表者名: Masato Ohtsuka
  • 学会等名: 10th Transgenic Technology Meeting(招待講演)
  • 発表場所: TradeWinds Island Grand Resort, USA
• [学会発表] 遺伝子トランスジェニックALSマウスモデルにおいてグリア線維性酸性蛋白の欠損は疾患進行に若干の影響を与える (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉井康裕、大友麻子、潘雷、大塚正人、岩崎泰雄、秦野伸二
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
• [学会発表] GFPuv遺伝子とTypeIIS制限酵素を用いた遺伝子発現ベクターの簡便な構築法とその応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 三浦浩美、佐藤正宏、猪子英俊、大塚正人
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
• [学会発表] 選択用薬剤を使わない簡便な遺伝子高発現細胞株の取得方法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、大塚正人、中村伸吾、櫻井敬之、渡部聡
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
• [図書] Human Diseases and Evolution. Chapter 13 (2011)
  • 著者名/発表者名: OhtsukaM., TakedaH., and Shimada A
  • 出版者: Double anal fin (Da): a medaka mutant exhibiting a mirror-image pattern duplication of the dorsal-ventral axis. in Medaka: Model for Organogesi
• [図書] a medaka mutant exhibiting a mirror-image pattern duplication of the dorsal-ventral axis. in Medaka: Model for Organogesis, Human Diseases and Evolution (2011)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M., Takeda H., and Shimada A.
  • 総ページ数: 15
  • 出版者: Springer press
• [産業財産権] 標的遺伝子のノックダウン方法およびそのためのRNAi用発現ベクター (2012)
  • 発明者名: 大塚正人、三浦浩美
  • 権利者名: 東海大学
  • 出願年月日: 2012-11-28
• [産業財産権] 部位特異的組換え系を利用した遺伝子導入方法およびそのためのキット (2012)
  • 発明者名: 大塚正人
  • 権利者名: 東海大学
  • 出願年月日: 2012-11-28
• [産業財産権] 標的遺伝子のノックダウン方法およびそのためのＲＮＡｉ用発現ベクター (2012)
  • 発明者名: 大塚正人、三浦浩美
  • 権利者名: 東海大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 2012-259950
  • 出願年月日: 2012-11-28
• [産業財産権] 部位特異的組換え系を利用した遺伝子導入方法およびそのためのキット (2012)
  • 発明者名: 大塚正人
  • 権利者名: 東海大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 2012-259951
  • 出願年月日: 2012-11-28