カイコを用いたヒト由来タンパク質のハイスループットな発現・精製システムの開発

• 研究課題/領域番号: 23760747
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 生物機能・バイオプロセス
• 研究機関: 静岡大学
• 研究代表者: 加藤 竜也 静岡大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (00397366)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2013年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2012年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2011年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
• キーワード: カイコ / ハイスループット / タンパク質発現 / かいこさなぎ / FLAGタグ / タンパク質精製

研究概要

カイコさなぎを用いて多種類の組換えタンパク質を一度に発現・精製できるシステムの構築を行った。組換えBmNPV DNAを大腸菌から96ウェルプレートを用いて抽出し、カイコさなぎにDNAを注射して組換えタンパク質を発現させる系を構築できた。またカイコさなぎから96ウェルプレートと精製用のレジンを用いて、組換えタンパク質を精製する系も構築できた。今後は精製や抽出ステップの改良を行うことで、より実用的な発現・精製システムの構築を目指す。

研究成果

• [雑誌論文] Construction of new ligation-independent cloning vectors for the expression and purification of recombinant proteins in silkworms using BmNPV bacmid system (2013)
  • 著者名/発表者名: Kato T, Thompson JR, Park EY
  • 雑誌名: PLoS One 巻: Vol.8, No.5
  • NAID: 120005257829
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction of new ligation-independent cloning vectors for the expression and purification of recombinant proteins in silkworms using BmNPV bacmid system (2013)
  • 著者名/発表者名: Tatsuya Kato, James R. Thompson, Enoch Y. Park
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 号: 5 ページ: e64007-e64007
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0064007
  • 査読あり
• [学会発表] マルチウェルプレートを用いたカイコ蛹での組換えタンパク質生産 (2013)
  • 著者名/発表者名: 加藤竜也、トンプソンジェームス、朴龍洙
  • 学会等名: 2013年度日本農芸化学会大会
  • 発表場所: 仙台市、東北大学
• [学会発表] Vector development for high-throughput protein expression in silkworms (2012)
  • 著者名/発表者名: T. Kato
  • 学会等名: IBS2012 15^<th> International Biotechnology Symposium and Exhibition
  • 発表場所: Daegu, South Korea
• [学会発表] Ligation-independent cloning法を用いたカイコ-バクミド発現用ベクターの構築 (2012)
  • 著者名/発表者名: 加藤竜也、トンプソンジェームス、朴龍洙
  • 学会等名: 2012年度日本農芸化学会大会
  • 発表場所: 京都市、京都女子大学
• [学会発表] マルチウェルプレートを用いたカイコ蛹での組換えタンパク質生産
  • 著者名/発表者名: 加藤竜也、トンプソン ジェームス、朴 龍洙
  • 学会等名: 日本農芸化学会2013年度大会
  • 発表場所: 東北大学川内北キャンパス（仙台）
• [学会発表] Ligation-independent cloning法を用いたカイコ-バクミド発現用ベクターの構築
  • 著者名/発表者名: 加藤 竜也、トンプソン ジェームス、朴 龍洙
  • 学会等名: 日本農芸化学会2012年度大会
  • 発表場所: 京都女子大学（京都）