２成分Ｋ＋／Ｈ＋アンチポーターＹｈａＴＵの大量精製系の確立と作用機序の解明

• 研究課題/領域番号: 23770156
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 機能生物化学
• 研究機関: 東洋大学
• 研究代表者: 藤澤 誠 東洋大学, 食環境科学部, 准教授 (70549641)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2013年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2012年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2011年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
• キーワード: イオンチャネル / トランスポーター / アンチポーター / チャネル / 部位特異的変異 / タンパク質精製 / K+/H+アンチポーター / 枯草菌

研究概要

枯草菌のK+/H+アンチポーターYhaTUは親水性タンパク質であるYhaTと膜タンパク質であるYhaUからなり、その機能からイオンチャネルとトランスポーターの中間的な存在であることが推測されている。本研究ではYhaTUの大量調製系の確立と、yhaTU遺伝子への部位特異的変異の導入により、YhaTUの作用機序を解明するための基盤を形成することを目的とした。
大量精製系の確立のためにStrepTagIIとHisタグを導入した融合遺伝子を作製した。部位特異的変異の導入においては、56種類の変異の導入に成功した。以上のことから、YhaTUの機能を解析するための基盤を形成できたと考えている。

研究成果

• [学会発表] Purification of YhaTU system, a K^+/H^+ a ntiporter from Bacillus subtilis. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kentaro Kato, Yu Tanaami, Makoto Fujisawa
  • 学会等名: The 35th Ann ual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan
  • 発表場所: 福岡国際会議場、マリンメッセ福岡, 福岡
  • 年月日: 2012-12-11
• [学会発表] 枯草菌K+/H+アンチポーターYhaTUシステムの精製 (Purification of YhaTU system, a K+/H+ antiporter from Bacillus subtilis.) (2012)
  • 著者名/発表者名: 加藤健太郎、田名網悠、藤澤誠 (Kentaro Kato, Yu Tanaami, Makoto Fujisawa)
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会大会 (The 35th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan.)
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
• [学会発表] Detection of YhaTU complex, a Two-Component K^+/H^+ Antiporter from Bacillus subtilis, by Pull-down Assay and Blue Native PAGE. (2011)
  • 著者名/発表者名: Makoto Fujisawa
  • 学会等名: 第9回国際シンポジウムバイオ科学とナノテクノロジーの融合に向けて
  • 発表場所: 東洋大学川越キャンパス, 埼玉
  • 年月日: 2011-12-10
• [学会発表] プルダウンアッセイとブルーネイティブゲル電気泳動法による枯草菌のK^+/H^+アンチポーターYhaTUシステムの複合体の検出 (2011)
  • 著者名/発表者名: 藤澤誠
  • 学会等名: 日本農芸化学会関東支部2011年度大会
  • 発表場所: 東洋大学板倉キャンパス, 群馬
  • 年月日: 2011-10-15
• [学会発表] Detection of YhaTU complex, a Two-Component K^+/H^+ Antiporter from Bacillus subtilis, by Pull-down Assay and Blue Native PAGE. (2011)
  • 著者名/発表者名: Makoto Fujisawa
  • 学会等名: International Union of Microbiological Societies 2011 Congress
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター, 北海道
• [学会発表] Detection of interaction between subunits of a two-component K^+/H^+. (2011)
  • 著者名/発表者名: Makoto Fujisawa
  • 学会等名: Gordon Research Conference–Mechanisms of Membrane
  • 発表場所: University of New England, 米国メイン州
• [学会発表] Detection of YhaTU complex, a Two-Component K+/H+ Antiporter from Bacillus subtilis, by Pull-down Assay and Blue Native PAGE. (2011)
  • 著者名/発表者名: Makoto Fujisawa
  • 学会等名: 9th International Symposium on Bioscience and Nanotechnology
  • 発表場所: Toyo University, Kawagoe, Saitama, Japan
• [学会発表] プルダウンアッセイとブルーネイティブゲル電気泳動法による枯草菌のK+/H+アンチポーターYhaTUシステムの複合体の検出 (2011)
  • 著者名/発表者名: 藤澤 誠
  • 学会等名: 日本農芸化学会関東支部2011年度大会
  • 発表場所: 東洋大学 板倉キャンパス（群馬県）
• [学会発表] Detection of YhaTU complex, a Two-Component K+/H+ Antiporter from Bacillus subtilis, by Pull-down Assay and Blue Native PAGE. (2011)
  • 著者名/発表者名: Makoto Fujisawa
  • 学会等名: International Union of Microbiological Societies 2011 Congress
  • 発表場所: Sapporo Convention Center,Hokkaido,Japan
• [学会発表] Detection of interaction between subunits of a two-component K+/H+ antiporter, YhaTU, from Bacillus subtilis. (2011)
  • 著者名/発表者名: Makoto Fujisawa
  • 学会等名: Gordon Research Conference - Mechanisms of Membrane Transport
  • 発表場所: University of New England, Biddeford, ME, USA