イヌ乳腺腫瘍原因遺伝子ＢＲＣＡ２を利用した乳腺腫瘍発症リスク診断法の確立

• 研究課題/領域番号: 23780326
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 臨床獣医学
• 研究機関: 北里大学
• 研究代表者: 吉川 泰永 北里大学, 獣医学部, 講師 (00552043)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• 研究課題ステータス: 中途終了 (2011年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2013年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2012年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円); 2011年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
• キーワード: BRCA2 / イヌ / 乳腺腫瘍 / リスク診断 / 変異

研究概要

イヌ乳腺腫瘍原因遺伝子である癌抑制遺伝子Breast Cancer early onset 2 (BRCA2)の変異は乳腺腫瘍発症と関係すると考えられている。そこでBRCA2の変異を検出することにより乳腺腫瘍のリスク診断が出来るのではないかと考えた。このリスク診断法を確立するためには、腫瘍発症と関係する変異を見いだす必要があった。本研究では以下の手順を踏むことで、乳腺腫瘍発症リスク診断法の確立を目指した。
１）イヌBRCA2遺伝子の変異を同定するために必須なコンセンサス配列が未決定であった。そこで、腫瘍を発症していない25検体のイヌのBRCA2の塩基配列を調べることでコンセンサス配列を決定した。２）約50検体のイヌ乳腺腫瘍組織のBRCA2の一部分の塩基配列を調べ、１）で決定したコンセンサス配列と比較することでBRCA2の腫瘍発症と関わる変異の候補を検索した。その結果、13種類のミスセンス変異を発見した。３）13種類のミスセンス変異のうち、2種類の変異（T1425P、K1435R）はBRCA2の機能ドメインであるBRC repeat 3（BRC3）に存在した。これらの変異が及ぼすBRC3機能への影響を調べるためにin vitroおよびin vivoにおいて解析した。その結果、いずれの変異もBRC3の機能に影響を与えた。
以上の結果より、T1425P、K1435R変異はBRCA2の機能に影響を与えることで乳腺腫瘍発症に関わっている可能性が考えられた。これらの変異の検出法の一部はすでに確立済みであるので、今後これらの変異検出法を乳腺腫瘍発症リスク診断法に応用していきたい。

研究成果

• [雑誌論文] Molecular cloning and tumour suppressor function analysis of canine REIC/Dkk-3 in mammary gland tumours (2013)
  • 著者名/発表者名: Ochiai, K., Watanabe, M., Azakami, D., Michishita, M., Yoshikawa, Y., Udagawa, C., Metheenukul, P., Chahomchuen, T., Aoki, H., Kumon, H., Morimatsu, M., Omi, T.
  • 雑誌名: Vet. J 巻: 197(3) 号: 3 ページ: 769-775
  • DOI: 10.1016/j.tvjl.2013.04.024
  • 査読あり
• [雑誌論文] Establishment of a PCR analysis method for canine BRCA2 (2012)
  • 著者名/発表者名: Yoshikawa Y, Morimatsu M, Ochiai K, Okuda K, Taoda T, Chikazawa S, Shimamura A, Omi T, Bonkobara M, Orino K, Watanabe K.
  • 雑誌名: BMC Res Notes 巻: (in press) 号: 1 ページ: 173-173
  • DOI: 10.1186/1756-0500-5-173
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effects of the missense mutations in canine BRCA2 on BRC repeat 3 functions and comparative analyses between canine and human BRC repeat 3 (2012)
  • 著者名/発表者名: Yoshikawa Y, Ochiai K, Morimatsu M, Suzuki Y, Wada S, Taoda T, Iwai S, Chikazawa S, Orino K, Watanabe K
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 7 号: 10 ページ: e45833-e45833
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0045833
  • 査読あり
• [学会発表] イヌ乳腺腫瘍で発見した癌関連遺伝子産物BRCA2における変異BRC repeat 3の機能解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 吉川 泰永
  • 学会等名: 第154回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 岩手大学
• [学会発表] 癌抑制遺伝子BRCA2のPCR法による変異解析法の確立 (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉川泰永、森松正美、鈴木 優、西村百合香、落合和彦、折野宏一、垰田高広、近澤征史郎、岩井聡美、島村麻子、 新井敏郎、渡辺清
  • 学会等名: 第152回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 大阪府立大学（大阪）
• [学会発表] イヌおよびヒトBRCA2のBRC repeat 3領域におけるミスセンス変異の比較 (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉川泰永、森松正美、落合和彦、折野宏一、和田成一、垰田高広、近澤征史郎、岩井聡美、渡辺清隆
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（横浜）
• [備考] 獣医学科 「研究成果 トピックス」/北里大学獣医学科
  • URL: http://www.kitasato-u.ac.jp/vmas/faculty/vm/topix_index.html