FFHybridプローブを用いた遺伝子発現の高感度,高精度,網羅的解析法の開発

• 研究課題/領域番号: 23790061
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 物理系薬学
• 研究機関: 静岡県立大学
• 研究代表者: 轟木 堅一郎 静岡県立大学, 薬学部, 准教授 (70341451)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2012年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2011年度: 2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
• キーワード: 分析化学 / 遺伝子解析 / HPLC / フルオラスケミストリー / フルオラス化学

研究概要

遺伝子発現量解析用プローブとして,オリゴDNAの両端に親フッ素性のフルオラスタグと蛍光物質フルオレセインを付加したFFhybridプローブを新たに開発した。本プローブとサーマルサイクラー,そしてフルオラスHPLC-蛍光検出システムを組み合せることで,既存のリアルタイムPCRと比較して感度,精度,網羅性に優れた遺伝子発現解析法を確立した。本法はプローブの構造を変えることでさらに多くの遺伝子量を同時定量することが可能であり,臨床化学分野などへの応用が期待できる。

研究成果

• [雑誌論文] Fully automated reagent peak-free liquid chromatography fluorescence analysis of highly polar carboxylic acids using a column-switching system and fluorous scavenging derivatization (2013)
  • 著者名/発表者名: K. Todoroki, H. Hashimoto, K. Machida, M. Itoyama, T. Hayama, H. Yoshida, H. Nohta, M. Nakashima, M. Yamaguchi
  • 雑誌名: Journal of Separation science 巻: 36 号: 2 ページ: 232-238
  • DOI: 10.1002/jssc.201200692
  • 査読あり
• [雑誌論文] Binary fluorous alkylation of biogenic primary amines with perfluorinated aldehyde followed by fluorous liquid chromatography-tandem mass spectrometry analysis (2012)
  • 著者名/発表者名: T. Hayama, Y. Sakaguchi, H. Yoshida, M. Itoyama, K. Todoroki, M. Yamaguchi, H. Nohta
  • 雑誌名: Analytical chemistry 巻: 84(19) 号: 19 ページ: 8407-8414
  • DOI: 10.1021/ac3020092
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chiral amines as reagents for HPLC-MS enantioseparation of chiral carboxylic acids. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsutsui H, Fujii S, Sakamoto T, Min JZ, Todoroki K, Toyo'oka T
  • 雑誌名: Journal of Separation Science 巻: 35 号: 13 ページ: 1551-1559
  • DOI: 10.1002/jssc.201200091
  • 査読あり
• [雑誌論文] Simultaneous determination of DL-lactic acid and DL-3-hydroxybutyric acid enantiomers in saliva of diabetes mellitus patients by high-throughput LC-ESI-MS/MS. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsutsui H, Mochizuki T, Maeda T, Noge I, Kitagawa Y, Min JZ, Todoroki K, Inoue K, Toyo'oka T.
  • 雑誌名: Analytical and Bioanalytical Chemistry 巻: 404 号: 6-7 ページ: 1925-1934
  • DOI: 10.1007/s00216-012-6320-0
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determination of Histamine in Microdialysis Samples from Guinea Pig Skin by High-performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection (2012)
  • 著者名/発表者名: T.Yoshitake, S.Ijiri, S.Yoshitake, K.Todoroki, H.Yoshida, J.Kehr, H.Nohta, M.Yamaguchi
  • 雑誌名: Skin Pharmacology and Physiology 巻: 25(2) 号: 2 ページ: 65-72
  • DOI: 10.1159/000330899
  • 査読あり
• [雑誌論文] Liquid chromatographic determination of microcystins in water samples following pre-column excimer fluorescence derivatization with 4-(1-pyrene)butanoic acid hydrazide (2012)
  • 著者名/発表者名: T. Hayama, K. Katoh, T. Aoki, M. Itoyama, K. Todoroki, H. Yoshida, M. Yamaguchi, H. Nohta
  • 雑誌名: Analytica Chimica Acta 巻: 755 ページ: 93-99
  • DOI: 10.1016/j.aca.2012.10.009
  • 査読あり
• [雑誌論文] Highly Sensitive and Selective Derivatization-LC Method for Biomolecules Based on Fluorescence Interactions and Fluorous Separations (2011)
  • 著者名/発表者名: K.Todoroki, H.Yoshida, T.Hayama, M.Itoyama, H.Nohta, M.Yamaguchi
  • 雑誌名: Journal of Chromatography B 巻: 879(17-18)(Invited Review) 号: 17-18 ページ: 1325-1337
  • DOI: 10.1016/j.jchromb.2010.11.038
  • 査読あり
• [雑誌論文] Selective liquid-chromatographic determination of native fluorescent biogenic amines in human urine based on fluorous derivatization (2011)
  • 著者名/発表者名: Y.Sakaguchi, H.Yoshida, T.Hayama, M.Itoyama, K.Todoroki, M.Yamaguchi, H.Nohta
  • 雑誌名: Journal of Chromatography A 巻: 218(33) 号: 33 ページ: 5581-5586
  • DOI: 10.1016/j.chroma.2011.05.076
  • 査読あり
• [雑誌論文] エキシマー蛍光誘導体化による水試料中アミノポリカルボン酸類のＬＣ分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: Kenji Katoh, Tadashi Hayama, Miki Itoyama, Kenichiro Todoroki, Hideyuki Yoshida, Masatoshi Yamaguchi, Hitoshi Nohta
  • 雑誌名: 分析化学 巻: 60 号: 1 ページ: 39-44
  • DOI: 10.2116/bunsekikagaku.60.39
  • NAID: 10027409883
  • ISSN: 0525-1931
  • 査読あり
• [雑誌論文] Selective determination of cysteines through precolumn double-labeling and liquid chromatography followed by detection of intramolecular FRET (2011)
  • 著者名/発表者名: Makoto Yoshitake, Hitoshi Nohta, Naoko Sejima, Kenichiro Todoroki, Hideyuki Yoshida and Masatoshi Yamaguchi
  • 雑誌名: Analytical and Bioanalytical Chemistry 巻: 399 号: 4 ページ: 1665-1675
  • DOI: 10.1007/s00216-010-4461-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fluorous Derivatization and Fluorous-phase Separation for Fluorometric Determination of Naproxen and Felbinac in Human Plasma (2011)
  • 著者名/発表者名: Y.Sakaguchi, H.Yoshida, T.Hayama, M.Yoshitake, M.Itoyama, K.Todoroki, M.Yamaguchi, H.Nohta
  • 雑誌名: Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 巻: 55(1) 号: 1 ページ: 176-180
  • DOI: 10.1016/j.jpba.2011.01.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Highly Sensitive Capillary Electrophoresis Analysis of N-Linked Oligosaccharides in Glycoproteins Following Fluorescence Derivatization with Rhodamine 110 and Laser-induced Fluorescence Detection (2011)
  • 著者名/発表者名: S.Ijiri, K.Todoroki, H.Yoshida, T.Yoshitake, H.Nohta, M.Yamaguchi
  • 雑誌名: Electrophoresis 巻: 32(24) 号: 24 ページ: 3499-3509
  • DOI: 10.1002/elps.201100258
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of Novel Fluorescence-Derivatization-HPLC Methods Enabling Highly Sensitive and Selective Analysis of Biological Compounds (2011)
  • 著者名/発表者名: Kenichiro Todoroki
  • 雑誌名: Yakugaku Zasshi 巻: 131 ページ: 1207-1211
  • NAID: 130001075910
  • 査読あり
• [学会発表] Dress-upキラルカラムによる光学活性物質のHPLC分離技術の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 石井裕大,豊田耕司,轟木堅一郎,閔俊哲,井之上浩一,豊岡利正
  • 学会等名: フルオラス科学研究会第5回シンポジウム
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2012-11-29
• [学会発表] 蛍光相互作用およびフルオラス分離技術を利用した生体成分の高感度・高選択的誘導体化-LC分析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 轟木堅一郎
  • 学会等名: 味の素イノベーション研究所セミナー
  • 発表場所: 川崎
  • 年月日: 2012-06-12
• [学会発表] 蛍光相互作用およびフルオラス分離技術を利用した生体成分の高感度・高選択的誘導体化-LC分析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 轟木堅一郎
  • 学会等名: 味の素イノベーション研究所セミナー
  • 発表場所: 川崎市
  • 招待講演
• [学会発表] ヒト爪中糖化中間体の迅速分析法の開発及び糖尿病診断への応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 閔俊哲
  • 学会等名: 第58回日本薬学会東海支部総会・大会
  • 発表場所: 静岡市
• [学会発表] ヒト爪中ジアセチルポリアミンの高感度迅速分析法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 諸田有佳
  • 学会等名: 第58回日本薬学会東海支部総会・大会
  • 発表場所: 静岡市
• [学会発表] イムノアフィニティー精製－HPLCによる血漿中抗体医薬品の選択的分析法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 豊田耕司
  • 学会等名: 第10回次世代を担う若手のためのフィジカル・ファーマフォーラム(PPF)2012
  • 発表場所: 京都市
• [学会発表] 安定同位体希釈UPLC-MS/MS法による微量血漿中の鎮静剤デクスメデトミジンの迅速測定 (2012)
  • 著者名/発表者名: 坂本亮
  • 学会等名: 第25回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • 発表場所: 東京都内
• [学会発表] 光学活性カルボン酸のキラル誘導体化LC-MS/MS分析 －唾液中DL-乳酸、DL-β-ヒドロキシ酪酸の定量－ (2012)
  • 著者名/発表者名: 筒井陽仁
  • 学会等名: 第25回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • 発表場所: 東京都内
• [学会発表] Rapid and sensitive determination of the intermediates of advanced glycation end products in human nail by UPLC-ESI-TOF-MS (2012)
  • 著者名/発表者名: Jun Zhe Min
  • 学会等名: 19th International Mass Spectrometry Conference (IMSC2012)
  • 発表場所: 京都市
• [学会発表] 日本酒中のチオール化合物のスクリーニング (2012)
  • 著者名/発表者名: 西村麻衣子
  • 学会等名: 第104回日本食品衛生学会学術講演会
  • 発表場所: 岡山市
• [学会発表] ヒト爪及び毛髪中遊離 D/L-アミノ酸の比を用いた糖尿病診断への試み (2012)
  • 著者名/発表者名: 閔俊哲
  • 学会等名: 新アミノ酸分析研究会 第2回学術講演会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] アミロイドβペプチドのC-末端アミノ酸配列を利用したトリプシン分解-UPLC-MS/MS定量法の検討 (2012)
  • 著者名/発表者名: 望月奈々
  • 学会等名: 新アミノ酸分析研究会 第2回学術講演会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] ヒト脳組織中アミロイドβを対象としたC-末端フラグメントターゲットの超高感度UPLC-MS/MSの開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 井之上浩一
  • 学会等名: 第23回クロマトグラフィー科学会議
  • 発表場所: 岐阜市
• [学会発表] 高温逆相HPLCによる抗体医薬品の分離挙動解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 豊田耕司
  • 学会等名: 新アミノ酸分析研究会 第2回学術講演会
  • 発表場所: 東京都内
• [学会発表] 高温逆相HPLCによる抗体医薬品の分離挙動解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中根敦子
  • 学会等名: 第23回クロマトグラフィー科学会議
  • 発表場所: 岐阜市
• [学会発表] 臭素原子を導入した高い同定能力を有するLC-MS/MS用誘導体化試薬の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 望月由布子
  • 学会等名: 第23回クロマトグラフィー科学会議
  • 発表場所: 岐阜市
• [学会発表] チオウレア構造を有するLC/ESI-MS/MSキラル誘導体化試薬の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 長尾竜治
  • 学会等名: 第23回クロマトグラフィー科学会議
  • 発表場所: 岐阜市
• [学会発表] Dress-upキラルカラムによる光学活性物質のHPLC分離技術の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 石井裕大
  • 学会等名: フルオラス科学研究会第5回シンポジウム
  • 発表場所: 仙台市
• [学会発表] Fluorous Scavenging Derivatization による高極性有機酸の蛍光誘導体化-超高速LC 分析法の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 轟木堅一郎,閔俊哲,中島学,豊岡利正
  • 学会等名: 第22回クロマトグラフィー科学会議
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2011-10-22
• [学会発表] Fluorous Scavenging Derivatization による高極性有機酸の蛍光誘導体化-超高速LC 分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 轟木堅一郎,閔俊哲,中島学,豊岡利正
  • 学会等名: フルオラス科学研究会第4回シンポジウム
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2011-10-07
• [学会発表] 分析化学トピックス3点盛り (2011)
  • 著者名/発表者名: 轟木堅一郎
  • 学会等名: 第24回九州分析化学若手の会春の講演会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 2011-05-23
• [学会発表] Fluorous Derivatization Combined with LC-MS/MS: Matrix Effect-Free Method for the determination of Biogenic Amines (2011)
  • 著者名/発表者名: Tadashi Hayama, Ryoko Abe, Rika Kuroki, Miki Itoyama, Kenichiro Todoroki, Hideyuki Yoshida, Hitoshi Nohta, Masatoshi Yamaguchi
  • 学会等名: IUPAC International Congress on Analytical Sciences 2011
  • 発表場所: Kyoto
• [学会発表] Analysis of Sialo-Sugar Chains Using Fluorous Derivatization Followed by Liquid Chromatography with Tandem Mass Spectrometry (2011)
  • 著者名/発表者名: Yohei Sakaguchi, Tadashi Hayama, Hideyuki Yoshida, Miki Itoyama, Kenichiro Todoroki, Hitoshi Nohta, Masatoshi Yamaguchi
  • 学会等名: IUPAC International Congress on Analytical Sciences 2011
  • 発表場所: Kyoto
• [学会発表] 分析化学トピックス3点盛り (2011)
  • 著者名/発表者名: 轟木堅一郎
  • 学会等名: 第24回九州分析化学若手の会春の講演会(招待講演)
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] 糖タンパク質中N型糖鎖の高感度キャピラリー電気泳動分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 井尻聡一郎，轟木堅一郎，吉田秀幸，吉武尚，能田均，山口政俊
  • 学会等名: 第18回クロマトグラフィーシンポジウム
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] ペンタフルオロフェニル構造を用いる分離指向性誘導体化法の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 川見祐介、坂口洋平、吉田秀幸、巴山忠、糸山美紀、轟木堅一郎、能田均、山口政俊
  • 学会等名: 第18回クロマトグラフィーシンポジウム
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] Fluorous Scavenging Derivatization（FSD）法による病態モデルマウス尿中有機酸の蛍光誘導体化-HPLC 分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 森 俊訓、橋本裕輝、轟木堅一郎、町田和之、糸山美紀、巴山忠、吉田秀幸、能田均、中島学、山口政俊
  • 学会等名: 第48回化学関連支部合同九州大会
  • 発表場所: 北九州
• [学会発表] フルオラス誘導体化-オンライン濃縮-蛍光検出法による自然蛍光性カルボン酸の高選択的LC分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 山下大貴、坂口洋平、池永純、吉田秀幸、糸山美紀、巴山忠、轟木堅一郎、能田均、山口政俊
  • 学会等名: 第48回化学関連支部合同九州大会
  • 発表場所: 北九州
• [学会発表] フルオラス誘導体化-LC-MS/MS 法によるシアル酸関連化合物の高感度かつ高選択的分析(4) 糖鎖性腫瘍マーカーへの適用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 坂口洋平、巴山忠、吉田秀幸、糸山美紀、轟木堅一郎、能田均、山口政俊
  • 学会等名: 第48回化学関連支部合同九州大会
  • 発表場所: 北九州
• [学会発表] LC-MSによる光学活性カルボン酸分離分析のための市販のキラル化合物の評価 (2011)
  • 著者名/発表者名: 筒井陽仁、藤井慎也、閔 俊哲、轟木堅一郎、豊岡利正
  • 学会等名: 第24回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • 発表場所: 大山
• [学会発表] ヒト毛髪中D,L-アミノ酸の迅速分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 閔 俊哲、諸田有佳、保坂大樹、轟木堅一郎、豊岡利正
  • 学会等名: 第24回バイオメディカル分析科学シンポジウム
  • 発表場所: 大山
• [学会発表] 健常人及び癌患者の爪中ポリアミンの分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 松本暁人、閔 俊哲、東達也、轟木堅一郎、豊岡利正
  • 学会等名: 第9回次世代を担う若手のためのフィジカル・ファーマフォーラム（PPF2011）
  • 発表場所: 箱根
• [学会発表] Fluorous Scavenging Derivatization法による高極性有機酸の高感度HPLC分析法の開発と病態モデルマウス尿試料分析への適用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 轟木堅⼀郎、橋本裕輝、森 俊訓、町田和之、糸山美紀、巴山 忠、吉田秀幸、能田 均、中島 学、山口政俊
  • 学会等名: 第9回次世代を担う若手のためのフィジカル・ファーマフォーラム（PPF2011）
  • 発表場所: 箱根
• [学会発表] クーロアレイ型電気化学検出器を用いた唾液中の酸化・還元物質の網羅的測定 (2011)
  • 著者名/発表者名: 山崎朝子、豊岡利正、閔 俊哲、轟木堅一郎:
  • 学会等名: 日本分析化学会第60年会
  • 発表場所: 名古屋
• [学会発表] フェネチルアミン系乱用薬物の光学異性体分離分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 谷口さゆり、平島晴生、稲垣真輔、閔 俊哲、轟木堅一郎、豊岡利正、花尻瑠理、合田幸広
  • 学会等名: 日本分析化学会第60年会
  • 発表場所: 名古屋
• [学会発表] Fluorous Scavenging Derivatization による高極性有機酸の蛍光誘導体化-超高速LC 分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 轟木堅一郎、閔 俊哲、中島 学、豊岡利正
  • 学会等名: フルオラス科学研究会第４回シンポジウム
  • 発表場所: 大阪
• [学会発表] Determination of DL-amino acids, derivatized with R(-)-DBD-PyNCS, in nail of diabetic patients by UPLC-ESI-TOF-MS (2011)
  • 著者名/発表者名: Jun Zhe Min, Suguru Hatanaka, Tatsuya Higashi, Kenichiro Todoroki, Toshimasa Toyo’oka
  • 学会等名: 37th International Symposium on High Performance Liquid Phase Separations and Related Techniques (HPLC 2011)
  • 発表場所: Dalian, China
• [学会発表] UPLC-TOF-MSを用いたヒト毛髪中遊離D-アミノ酸の分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 閔 俊哲、保坂大樹、諸田有佳、轟木堅一郎、豊岡利正
  • 学会等名: 第22回クロマトグラフィー科学会議
  • 発表場所: 仙台
• [学会発表] 生体内光学活性カルボン酸の誘導体化LC-MS/MS分析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 筒井陽仁、藤井慎也、閔 俊哲、轟木堅一郎、豊岡利正
  • 学会等名: 第22回クロマトグラフィー科学会議
  • 発表場所: 仙台
• [備考]
  • URL: http://w3pharm.u-shizuoka-ken.ac.jp/~analchem/