ミトコンドリア集積性アルギニンペプチドの機能評価と活性分子送達への応用

• 研究課題/領域番号: 23790129
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 創薬化学
• 研究機関: 大阪府立大学 (2013); 京都大学 (2011-2012)
• 研究代表者: 中瀬 生彦 大阪府立大学, 21世紀科学研究機構, 講師 (40432322)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2012年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2011年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円)
• キーワード: 膜透過性ペプチド / ミトコンドリア / 薬物送達 / アルギニン / エンドサイトーシス / アポトーシス

研究概要

本研究では、エネルギー産生や細胞の生死に関わるミトコンドリアに着目し、ミトコンドリア標的能を有する膜透過性ペプチドの創製を試みた。脂質膜においてヘリックス構造をとる両親媒性の人工抗菌ペプチド、KLAペプチドを基に、ミトコンドリア標的ペプチドをデザインし、それぞれの細胞内移行量や局在性を検討した。KLAペプチドの全てのリジンをアルギニンに変えたRLAペプチドは、約40倍もの高い細胞内移行効率を示し、高いミトコンドリア集積性を示すことを確認した。また、RLAペプチドを結合したBcl-xLタンパク質由来BH4配列は、高いミトコンドリア集積性及び抗アポトーシス活性を示すことを明らかにした。

研究成果

• [雑誌論文] .Molecular interplays involved in the cellular uptake of octaarginine on cell surfaces and the importance of syndecan-4 cytoplasmic V domain for the activation of protein kinase Calpha. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Katsuhiro Osaki, Gen Tanaka, Atsushi Utani, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: in press ページ: 857-862
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2014.03.018
  • 査読あり
• [雑誌論文] Curvature engineering: positive membrane curvature induced by epsin N-terminal peptide boosts internalization of octaarginine (2013)
  • 著者名/発表者名: Silvia Pujals, Hiroki Miyamae, Sergii Afonin, Tomo Murayama, Hisaaki Hirose, Ikuhiko Nakase, Kentaro Taniuchi, Masato Umeda, Kazutami Sakamoto, Anne S. Ulrich, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: ACS Chemical Biology 巻: 8 ページ: 1894-1899
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a novel nanoparticle by dual modification with the pluripotential cell-penetrating peptide PepFect6 for cellular uptake, endosomal escape and decondensation of an siRNA core complex (2013)
  • 著者名/発表者名: Mitsueda A, Shimatani Y, Ito M, Ohgita T, Yamada A, Hama S, Gräslund A, Lindberg S, Langel U, Harashima H, Nakase I, Futaki S, Kogure K
  • 雑誌名: Biopolymers (Peptide Science) 巻: Vol.100 ページ: 698-704
  • DOI: 10.1002/bip.22310
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effects of pyrenebutyrate on the translocation of arginine-rich cell-penetrating peptides through artificial membranes : Recruting peptides to the membranes, dissipating liquid-ordered phases, and including curvature (2013)
  • 著者名/発表者名: Sayaka Katayama, Ikuhiko Nakase, Yoshiaki Yano, Tomo Murayama, Yasushi Nakata, Yoshiaki Okada, Katsumi Matsuzaki, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Biochemica et Biophysica Acta-Biomembranes 巻: 1828 ページ: 2134-2142
  • DOI: 10.1016/j.bbamem.2013.05.016
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of cellular proteins interacting with octaarginine (R8) cell-penetrating peptide by photo-crosslinking (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshimasa Kawaguchi, Gen Tanaka, Ikuhiko Nakase, Miki Imanishi, Junya Chiba, Yasumaru Hatanaka, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 巻: 23 ページ: 3738-3740
  • DOI: 10.1016/j.bmcl.2013.05.008
  • 査読あり
• [雑誌論文] Collagen-like cell-penetrating peptides (2013)
  • 著者名/発表者名: Chisato M. Yamazaki, Ikuhiko Nakase, Hiroyuki Endo, Saya Kishimoto, Yoshihiro Mashiyama, Ryo Masuda, Shiroh Futaki, Takaki Koide
  • 雑誌名: Angewandte Chemie International Edition 巻: 52 ページ: 5497-5500
  • DOI: 10.1002/anie.201301266
  • 査読あり
• [雑誌論文] Oligopeptides derived from autiphosphorylation sites of EGF receptor suppress EGF-stimulated responses in human lung carcinoma A549 cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshihiro Kuroda
  • 雑誌名: Eur J Pharmacol. 巻: 698 ページ: 87-94
  • DOI: 10.1016/j.ejphar.2012.10.007
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cell-penetrating peptides (CPPs) as a vector for the delivery of siRNAs into cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Gen Tanaka, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Molecular Biosystems 巻: 9 ページ: 855-861
  • DOI: 10.1039/c2mb25467k
  • 査読あり
• [雑誌論文] Transformation of an antimicrobial peptide into a plasmamembrane-permeable, mitochondriatargeted peptide via the substitution oflysine with arginine. (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Shinya Okumura, Sayaka Katayama, Hisaaki Hirose, Silvia Pujals, Hirofumi Yamaguchi, Satoko Arakawa, Shigeomi Shimizu, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Chem Commun. 巻: 48 ページ: 11097-11099
  • DOI: 10.1039/c2cc35872g
  • 査読あり
• [雑誌論文] CXCR4 stimulates macropinocytosis : implications for cellular uptake of arginine-rich cell-penetrating peptides and HIV (2012)
  • 著者名/発表者名: Gen Tanaka, Ikuhiko Nakase, et al.
  • 雑誌名: Chem Biol 巻: 19 ページ: 1437-1446
  • DOI: 10.1016/j.chembiol.2012.09.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Bioinspired mechanism for the translocation of peptide through the cell-membrane (2012)
  • 著者名/発表者名: Kazutami Sakamoto, Kenichi Aburai, Taku Morishita, Kenichi Sakai, Hideki Sakai, Masahiko Abe, Ikuhiko Nakase, and Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Chem. Lett. 巻: 41 号: 10 ページ: 1078-1080
  • DOI: 10.1246/cl.2012.1078
  • NAID: 130004426340
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of the attachment of a penetration accelerating sequence and the influence of hydrophobicity on octaarginine-mediated intracellular delivery (2012)
  • 著者名/発表者名: Kentaro Takayama, Hisaaki Hirose, Gen Tanaka, Silvia Pujals, Sayaka Katayama, Ikuhiko Nakase, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Molecular Pharmaceutics 巻: 9 ページ: 1222-1230
  • DOI: 10.1021/mp200518n
  • 査読あり
• [雑誌論文] Accumulation of arginine-rich cell-penetrating peptides in tumors and the potential for anticancer drug delivery in vivo (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Yusuke Konishi, Masashi Ueda, Hideo Saji, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Journal of Controlled Release 巻: 159 ページ: 181-188
  • DOI: 10.1016/j.jconrel.2012.01.016
  • 査読あり
• [雑誌論文] Transient Focal Membrane Deformation Induced by Arginine? rich Peptides Leads to Their Direct Penetration into Cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Hirose, H., Takeuchi, T., Osakada, H., Pujals, S., Katayama, S., Nakase, I., Kobayashi, S., Haraguchi, T., Futaki, S
  • 雑誌名: Molecular Therapy 巻: (in press) ページ: 984-993
  • DOI: 10.1038/mt.2011.313
  • 査読あり
• [雑誌論文] Signal transduction of biological systems through an artificial receptor system via dimerization of a bivalent leucine-zipper ligand (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Shinya Okumura, Gen Tanaka, Katsuhiro Osaki, Miki Imanishi, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Angewandte Chemie International Edition 巻: 51 ページ: 7464-7467
  • DOI: 10.1002/anie.201201805
  • 査読あり
• [雑誌論文] Efficient intracellular delivery of nucleic acid pharmaceuticals using cell-penetrating peptides (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Hidetaka Akita, Kentaro Kogure, Astrid Gräslund, Ulo Langel, Hideyoshi Harashima, Shiroh Futaki
  • 雑誌名: Accounts of Chemical Research 巻: -
  • 査読あり
• [学会発表] アルギニンペプチドの細胞内取り込みにおけるsyndecan-4とPKCαの寄与 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、大崎勝弘、二木史朗
  • 学会等名: 日本薬学会第133年会
  • 発表場所: 神奈川
  • 年月日: 2013-03-30
• [学会発表] 膜透過性アルギニンペプチドを用いた効率的な細胞内導入 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: ペプチド研究所若手セミナー
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2013-03-08
• [学会発表] Tumor accumulation of arginine-rich cell-penetrating peptides and delivery of anticancer drug in vivo (2013)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Yusuke Konishi, Masashi Ueda, Hideo Saji, Shiroh Futaki
  • 学会等名: 2^<nd> International Conference on Biomaterials Science in Tukuba (ICBS2013)
  • 発表場所: 茨城
• [学会発表] 曲率誘導ペプチド存在下でのアルギニンペプチドの細胞内移行促進 (2013)
  • 著者名/発表者名: 村山知、Silvia Pujals、宮前皓樹、中瀬生彦、二木史朗
  • 学会等名: 日本ケミカルバイオロジー学会 第8回年会
  • 発表場所: 東京医科歯科大学
• [学会発表] IGF-1Rの自己リン酸化部位由来ペプチドがMCF-7ヒト乳がん細胞に及ぼす影響 (2013)
  • 著者名/発表者名: 黒田義弘、小越菜保子、田崎絵美、中瀬生彦、二木史朗、通山由美、廣瀬宗考
  • 学会等名: 第86回日本生化学会大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
• [学会発表] Promotion of translocation of octaarginine through membranes by curvature inducing peptide (2013)
  • 著者名/発表者名: Shiroh Futaki, Silvia Pujals, Tomo Murayama, Hiroki Miyamae, Ikuhiko Nakase
  • 学会等名: 4th Asia-Pacific International Peptide Symposium, 50th Japanese Peptide Symposium
  • 発表場所: 大阪 ホテル阪急エキスポパーク
• [学会発表] Identifying proteins responsible to the cellular uptake of octaarginine using photocrosslinking (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshimasa Kawaguchi, Keiko Kuwata, Gen Tanaka, Toshihide Takeuchi, Ikuhiko Nakase, Shiroh Futaki
  • 学会等名: 4th Asia-Pacific International Peptide Symposium, 50th Japanese Peptide Symposium
  • 発表場所: 大阪 ホテル阪急エキスポパーク
• [学会発表] 膜透過性アルギニンペプチドを用いた効率的な細胞内導入 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: ペプチド研究所 若手セミナー
  • 発表場所: 株式会社ペプチド研究所、大阪・彩都
  • 招待講演
• [学会発表] アルギニンペプチドの効率的な細胞内移行 : 機序と展開 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: 第34回生体膜と薬物の相互作用シンポジウム
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2012-11-16
• [学会発表] ミトコンドリアを標的とする膜透過ペプチドの創製と活性分子の細胞内送達 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、片山沙綾香、奥村真也、二木史朗
  • 学会等名: 第49回ペプチド討論会
  • 発表場所: 鹿児島
  • 年月日: 2012-11-09
• [学会発表] ミトコンドリアを標的とする細胞膜透過ペプチドベクターの創製 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、片山沙綾香、奥村真也、二木史朗
  • 学会等名: 第6回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 北海道
  • 年月日: 2012-09-06
• [学会発表] 細胞機能探索に有用なペプチドツール〜細胞内導入と受容体創製〜 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: サントリー生命科学財団生物有機科学研究所シンポジウム
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2012-08-27
• [学会発表] In vivoにおけるアルギニンペプチドの腫瘍集積と抗癌剤送達への応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、小西雄介、上田真史、佐治英郎、二木史朗
  • 学会等名: 第28回日本DDS学会学術集会
  • 発表場所: 北海道
  • 年月日: 2012-07-05
• [学会発表] 膜透過性ペプチドの効率的な細胞内移行 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: 第12回日本蛋白質科学会年会
  • 発表場所: 愛知
  • 年月日: 2012-06-20
• [学会発表] Efficient internalization of arginine-rich cell-penetrating peptide through cell membranes (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Shiroh Futaki
  • 学会等名: Satellite mini-workshop of IACIS 2012
  • 発表場所: 千葉
  • 年月日: 2012-05-12
• [学会発表] In vivoにおける膜透過性ペプチドの腫瘍集積と抗癌剤送達 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、小西雄介、上田真史、佐治英郎、二木史朗
  • 学会等名: 日本薬学会第132年会
  • 発表場所: 北海道
• [学会発表] ミトコンドリアを標的にする膜透過性ペプチドの創製と活性分子送達 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、片山沙綾香、奥村真也、二木史朗
  • 学会等名: 日本薬学会第132年会
  • 発表場所: 北海道
• [学会発表] Mechanisms to attain efficient cellular uptake of arginine-rich cell-penetrating peptides (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Shiroh Futaki
  • 学会等名: Peptide therapeutics Conference 2012
  • 発表場所: スペイン
• [学会発表] ヘリックス相互作用で活性化可能な人工EGF受容体の創製と細胞機能制御 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、大崎勝弘、奥村真也、二木史朗
  • 学会等名: 日本ケミカルバイオロジー学会 第7回年会
  • 発表場所: 京都大学
• [学会発表] 細胞機能探索に有用なペプチドツール～細胞内導入と受容体創製～ (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: サントリー生命科学財団 生物有機科学研究所シンポジウム
  • 発表場所: サントリー生命科学財団 生物有機科学研究所
  • 招待講演
• [学会発表] ロイシンジッパー二量体リンカーを用いた受容体の活性化とシグナル誘導 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、奥村真也、田中弦、大崎勝弘、今西未来、二木史朗
  • 学会等名: 第6回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 北海道大学
• [学会発表] アルギニンペプチドの効率的な細胞内移行：機序と展開 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: 第34回生体膜と薬物の相互作用シンポジウム
  • 発表場所: 京都大学
  • 招待講演
• [学会発表] Creation of artificial epidermal growth factor receptor activated by bivalent leucine-zipper ligand (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Gen Tanaka, Shinya Okumura, Katsuhiro Osaki, Shiroh Futaki
  • 学会等名: The 2nd International Conference on MEXT Project of Integrated Research on Chemical Synthesis “Molecular Functions in Complex Systems”
  • 発表場所: 名古屋大学
• [学会発表] Mechanisms to attain efficient cellular uptake of arginine-rich cell-penetrating peptides (2012)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase
  • 学会等名: Peptide Therapeutics Conference 2012(招待講演)
  • 発表場所: Hesperia, Lanzarote, Spain
• [学会発表] 膜透過性ペプチドの作用メカニズム (2011)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: 第29回物性物理化学研究会「膜のダイナミズムと薬物透過:基礎から予測・制御まで」
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2011-05-20
• [学会発表] Tumor accumulation of arginine-rich cell-penetrating peptides and anticancer drug delivery in vivo (2011)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Yusuke Konishi, Masashi Ueda, Hideo Saji, Shiroh Futaki
  • 学会等名: 8^<th> AFMC International Medicinal Chemistry Symposium"Frontier of Medicinal Science"
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] フォトクロスリンク法によるアルギニンペプチド受容体同定の試み (2011)
  • 著者名/発表者名: 二木史朗、田中弦、中瀬生彦、福田保則、畑中保丸
  • 学会等名: 第37回反応と合成の進歩シンポジウム
  • 発表場所: 徳島
• [学会発表] Mechanisms of efficient cellular uptake of arginine-rich cell-penetrating peptides (2011)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: 第48回ペプチド討論会
  • 発表場所: 北海道
• [学会発表] 膜透過性アルギニンペプチドのマウス体内動態及び腫瘍集積性 (2011)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、小西雄介、上田真史、佐治英郎、二木史朗
  • 学会等名: 第48回ペプチド討論会
  • 発表場所: 北海道
• [学会発表] In vivoにおける膜透過性アルギニンペプチドの腫瘍集積 (2011)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、小西雄介、上田真史、佐治英郎、二木史朗
  • 学会等名: アンチセンス・遺伝子・デリバリーシンポジウム
  • 発表場所: 大阪
• [学会発表] 膜透過性ペプチドの作用メカニズム (2011)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: 第29回物性物理化学研究会「膜のダイナミズムと薬物透過：基礎から予測・制御まで」(招待講演)
  • 発表場所: 京都大学
• [学会発表] Tumor accumulation of arginine-rich cell-penetrating peptides and anticancer drug delivery in vivo (2011)
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Yusuke Konishi, Masashi Ueda, Hideo Saji, Shiroh Futaki
  • 学会等名: 8th AFMC International Medicinal Chemistry Symposium "Frontier of Medicinal Science"
  • 発表場所: 京王プラザホテル、東京
• [学会発表] ヘリックス間相互作用で活性化される人工EGF受容体の創製と細胞機能制御 (2011)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、大崎勝弘、奥村真也、二木史朗
  • 学会等名: 第2回京都大学GCOE-理化学研究所 共同シンポジウム
  • 発表場所: 京都大学
• [学会発表] ヘリックス二量体リガンドで活性化される人工EGF受容体の創製と細胞機能制御 (2011)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、大崎勝弘、奥村真也、二木史朗
  • 学会等名: 第48回ペプチド討論会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター
• [学会発表] ヘリックス間相互作用認識で活性化される人工EGF受容体の創製 (2011)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、奥村真也、大崎勝弘、二木史朗
  • 学会等名: 第5回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: つくば国際会議場
• [学会発表] Development of intracellular delivery systems using cellular nanomaterials
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase
  • 学会等名: The 7th NanoSquare Workshop, The First Osaka Prefecture University TT-net Workshop
  • 発表場所: 大阪府立大学
  • 招待講演
• [学会発表] Roles of syndecan-4 and PKCα fpr internalization of arginine-rich cell-penetrating peptides into cells
  • 著者名/発表者名: Ikuhiko Nakase, Katsuhiro Osaki, Shiroh Futaki
  • 学会等名: The International Symposium Organized by Institute for Chemical Research (ICR), Kyoto University
  • 発表場所: 京都大学化学研究所
• [学会発表] Identification of biomolecules involved in the cellular uptake of octaarginine by photo-crosslinking
  • 著者名/発表者名: Yoshimasa Kawaguchi, Keiko Kuwata, Gen Tanaka, Toshihide Takeuchi, Ikuhiko Nakase, Yasumaru Hatanaka, Shiroh Futaki
  • 学会等名: The International Symposium Organized by Institute for Chemical Research (ICR), Kyoto University
  • 発表場所: 京都大学化学研究所
• [学会発表] 細胞由来ナノマテリアルを基盤にした薬物送達と機能性ペプチドの利用
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦
  • 学会等名: 生命分子機能研究会セミナー2014「ペプチドの形から薬をつくる」
  • 発表場所: 長浜バイオ大学
  • 招待講演
• [学会発表] 光架橋法によるオクタアルギニンペプチドの細胞内移行関連タンパク質の同定
  • 著者名/発表者名: 川口祥正、田中弦、中瀬生彦、武内敏秀、畑中保丸、二木史朗
  • 学会等名: 日本薬学会第134年会
  • 発表場所: 熊本大学
• [図書] 応用が広がるDDS-人体環境から農業・家電まで- (2013)
  • 著者名/発表者名: 二木史朗、田中弦、中瀬生彦
  • 総ページ数: 139
  • 出版者: 株式会社エヌ・ティー・エス刊
• [図書] 細胞膜透過ペプチドによるタンパク質細胞導入、試料分析講座「タンパク質分析」 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、二木史朗
  • 出版者: 日本分析化学会編
• [図書] 最新ペプチド合成技術とその創薬研究への応用 遺伝子医学MOOK (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、田中弦、二木史朗
• [図書] 遺伝子医学 MOOK「最新ペプチド合成技術とその創薬研究への応用」 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、田中弦、二木史朗
  • 出版者: メディカルドゥ
• [図書] 試料分析講座「タンパク質分析」日本分析化学会編 (2012)
  • 著者名/発表者名: 中瀬生彦、二木史朗
  • 出版者: 丸善出版
• [図書] 蛍光イメージング/MRIプローブの開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 二木史朗、中瀬生彦
  • 出版者: CMC出版
• [図書] ペプチド・タンパク質性医薬品の新規DDS製剤の開発と応用 遺伝子医学MOOK別冊 (2011)
  • 著者名/発表者名: 二木史朗、中瀬生彦
• [備考]
  • URL: http://www.nanosq.21c.osakafu-u.ac.jp
• [備考] 大阪府立大学 文部科学省「テニュアトラック普及・定着事業」プログラム
  • URL: https://www.nanosq.21c.osakafu-u.ac.jp